不同年齡人群內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量與增殖、遷移、黏附、分泌功能的研究.pdf

1、研究目的: 觀察不同年齡人群血液中分離獲得的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的形態(tài),探索內(nèi)皮祖細(xì)胞在數(shù)量及功能上的區(qū)別,了解年齡對細(xì)胞的影響,為臨床應(yīng)用細(xì)胞及分子水平的治療提供理論基礎(chǔ). 方法: 選擇健康新生兒的臍靜脈血和健康成年中青年、老年人的外周血各20例,密度梯度離心法從血液中分離獲取單個(gè)核細(xì)胞,接種在人纖維連接蛋白(h-FBN)包被的培養(yǎng)板,培養(yǎng)4天后更換培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3天后收集貼壁細(xì)胞進(jìn)行分析.激光共聚焦顯微鏡

2、鑒定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL雙染色陽性細(xì)胞為正在分化的EPCs,流式細(xì)胞儀檢測其表面標(biāo)志進(jìn)一步鑒定EPCs,倒置熒光顯微鏡下計(jì)數(shù).采用MTT比色法和改良的Boyden小室和黏附能力測定實(shí)驗(yàn)觀察EPCs的增殖、遷移、黏附能力.用ELISA法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液的細(xì)胞趨化因子基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)的濃度,測定其分泌功能. 結(jié)果: 臍血、中青年及老年人外周血中EPCs的數(shù)量分別為(203.0±20.7

3、)、(62.5±10.6)、(44.6±9.1)EPCs/視野(×200),比較發(fā)現(xiàn)臍血的EPCs數(shù)量比中青年及老年人明顯增多,中青年的EPCs數(shù)量比老年人明顯增多:臍血EPCs的增殖、遷移、黏附能力強(qiáng)于中青年及老年人,中青年EPCs的增殖、遷移能力強(qiáng)于老年人,但黏附能力沒有顯著差異.臍血、中青年及老年人外周血EPCs分泌SDF-1的濃度分別為(258.65±30.51)、(131.94±20.43)、(125.58±18.50)pg/