不同年齡人群脂肪干細胞體外成脂、成骨誘導分化能力的比較.pdf

1、目前，國內外很多研究結果均顯示，在脂肪組織中同樣存在具有多向分化潛能的基質干細胞。由于骨髓組織來源的干細胞獲取來源有限、獲得困難等不利因素，限制了其應用。而脂肪組織來源的干細胞作為一種干細胞的新來源，具有一定的潛在的優(yōu)越性。使得脂肪干細胞的研究迅速成為研究的新熱點。隨著研究的深入，各種更細節(jié)的問題都將會被考慮。目前，國內外對于不同年齡人群的脂肪干細胞成脂、成骨能力是否存在差異尚無統(tǒng)一認識。本實驗在于觀察年齡對人脂肪干細胞體外成脂、成骨分

2、化的影響，為脂肪干細胞的進一步應用提供實驗依據。 方法： 1.分三組：兒童(<14歲)(n=5)、成年(30-35歲)(n=5)、老年(>60歲)(n=5)。 2.采用第3代ADSCs細胞，以105/孔接種于6孔板，待其生長融合后，于普通培養(yǎng)液中分別加入成脂誘導劑進行培養(yǎng)。成脂誘導2周后進行油紅0染色檢測，染色后脂滴所占的面積百分比采用圖像分析軟件(Image—ProPlus，美國)進行定量分析。 3.同

3、樣采用第3代ADSCs細胞，以105/孔接種于6孔板，待其生長融合后，于普通培養(yǎng)液中分別加入成骨誘導劑進行培養(yǎng)。成骨誘導2周后進行堿性磷酸酶的定量檢測。得到各個標本細胞的堿性磷酸酶數值，再計算各年齡組的堿性磷酸酶數值。成骨誘導4周后進行von Kossa染色。采用圖像處理軟件(Image——ProPlus，美國)對染色后鈣化面積進行定量分析。 結果： 1.細胞接種48小時后大部分細胞已貼壁生長，并開始伸展，呈成纖維細胞樣

4、梭形，6-7天基本融合，傳代細胞穩(wěn)定。 2.細胞經成脂誘導后形態(tài)發(fā)生變化，由長梭形變成不規(guī)則的圓型，胞漿中可見大小不等的脂滴，有的相互融合，形成較大的脂滴。油紅0染色顯示紅色的脂滴，圖像分析軟件顯示各組成脂情況存在一定的差異，老年組成脂水平均低于兒童組及成年組。 3.細胞經成骨誘導后由長梭形變?yōu)楸鈭A型，2周時行堿性磷酸酶定量檢測時發(fā)現(xiàn)細胞著色呈粉紅或紫紅色，各組定量結果顯示年齡增加其成骨能力下降。4周時進行von Kos