依達拉奉灌注液對斷肢再植術后肢體保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:臨床上各種原因所致的肢體離斷十分常見,隨著顯微外科技術的發(fā)展,使斷肢再植手術的成功率不斷提高,但是如何延長離斷肢體的保存時間,預防缺血再灌注損傷(IR),更好的恢復再植后的肢體功能,目前仍處于探索階段。減輕斷肢再植術后繼發(fā)的再灌注損傷,特別是對骨骼肌的損傷直接關系到再植后肢體的功能。
　　 缺血組織恢復血供后組織損傷進一步加重的現象即缺血再灌注損傷,其發(fā)生機制較為復雜,但自由基在這一過程中具有重要作用。依達拉奉是日本厚生省

2、于2001年批準上市的新型強效自由基清除劑,本實驗通過改進兔后肢缺血再灌注模型,增加樣本含量及觀察指標,觀察依達拉奉對斷肢再植術后骨骼肌發(fā)生缺血再灌注損傷的保護作用。
　　 方法:
　　 選用健康SD兔18只制作斷肢再植術后模型(均由河北醫(yī)科大學動物實驗中心提供),根據干預方法的不同將18只SD兔隨機分為3組,每組6只,為空白對照組、缺血再灌注組(IR組)、依達拉奉保護組(依達拉奉組)。用17％戊巴比妥鈉(40～60mg

3、/kg)耳緣靜脈麻醉。麻醉平穩(wěn)后(角膜反射消失),沿左股動靜脈血管束切開皮膚,在放大10倍手術顯微鏡下從左腹股溝至膝關節(jié)游離出股動脈、股靜脈,結扎除腹壁淺動、靜脈以外的所有分支。將離斷水平以遠的肢體中殘存的血液自腹壁淺靜脈放出,完全切斷除股動脈、股靜脈以外的所有結構(包括股骨干),縫扎止血。再用無創(chuàng)傷血管夾在腹壁淺動脈遠、近端夾住股動脈建立大鼠左后肢斷肢模型。將暴露的組織用37.3℃溫林格氏液紗布覆蓋。空白對照組單純游離股動靜脈后,不再

4、給與其它處理。IR組SD兔左后肢缺血2.5小時后,用粗細相當的克氏針將股骨干髓內固定,離斷肌肉進行縫合(此過程于30min完成),之后松開血管夾恢復肢體血供。依達拉奉組SD兔左后肢缺血2.5小時后,重復上述再植過程,松開股動脈遠端血管夾,自腹壁淺動脈用靜脈輸液泵以50ml/h的速度灌注,待清亮的灌注液自腹壁淺靜脈流出后,松開股動脈近端血管夾恢復肢體血供。于再灌注后2小時、4小時、8小時、12小時取材。分別測定三組骨骼肌超氧化物歧化酶(S

5、OD)、丙二醛(MDA)、髓過氧化物酶(MPO)、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶,濕重/干重比值(W/D)等指標的變化,以及觀察骨骼肌組織學的結構變化。
　　 結果:
　　 光鏡結果顯示缺血再灌注組的骨骼肌纖維隨著時間的延長肌纖維水腫程度逐漸加重,肌纖維壞死后斷裂的數量逐漸增多,排列逐漸紊亂,血管周圍炎性細胞浸潤數量逐漸增多;依達拉奉組肌纖維基本變化趨勢同對照組,但同時間橫向比較,組織的損傷程度要好于對照組;