表面等離子共振和熒光猝滅動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)三種天然色素與人唾液及富組蛋白5的相互作用.pdf

1、目的：采用表面等離子共振技術(shù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)人唾液和唾液富組蛋白5吸附三種天然色素的過(guò)程，運(yùn)用熒光猝滅技術(shù)考察不同色素導(dǎo)致Histatin5內(nèi)源性熒光猝滅程度上的差異，進(jìn)而研究色素與唾液蛋白之間相互作用的機(jī)制。 方法：選擇茶黃素(TF)、矢車(chē)菊素(cy)和姜黃素(Cur)，分別將其與自組裝的人類(lèi)全唾液(WS)和Histatin5(H5)的芯片相互作用，運(yùn)用表面等離子共振技術(shù)(SPR)原位、實(shí)時(shí)和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)TF、Cy和Cur吸附于蛋白表面的

2、過(guò)程，根據(jù)Langmuir(L)和Freundlich(F)吸附等溫線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)(R2)判斷三種色素在全唾液和Histatin5表面的吸附模型，計(jì)算吸附動(dòng)力學(xué)常數(shù)：L常數(shù)(K)、飽和吸附量(Mm)、F常數(shù)(Kf)、F吸附強(qiáng)度常數(shù)(1/n)、吸附速率和解離常數(shù)(ka和kd)、結(jié)合和解離平衡常數(shù)(KA和KD)。運(yùn)用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)不同色素導(dǎo)致H5內(nèi)源性的熒光猝滅，計(jì)算猝滅常數(shù)：Stem-Volmer猝滅常數(shù)(Ksv)、雙分子猝滅常數(shù)(kq

3、)、表觀(guān)猝滅常數(shù)(Kapp)、動(dòng)態(tài)和靜態(tài)猝滅常數(shù)(KD和KS)、表觀(guān)靜態(tài)猝滅常數(shù)(K)、靜態(tài)猝滅結(jié)合常數(shù)(KLB)和表觀(guān)靜態(tài)猝滅結(jié)合常數(shù)(KA)及結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)。單因素方差分析及SNK-q檢驗(yàn)比較色素對(duì)WS和H5的R2、吸附動(dòng)力學(xué)常數(shù)及熒光猝滅常數(shù)總體均數(shù)和均數(shù)之間的差異，檢驗(yàn)水平α=0.05。 結(jié)果：L和F模型均能用于描述Cy/WS和TF/ H5的吸附過(guò)程，而TF/WS、Cur/WS、Cy/ H5和Cur/H5的吸附過(guò)程用F

4、模型更合適。色素/H5和色素/WS之間相互作用的強(qiáng)度程度為Cur>TF和cy，飽和吸附質(zhì)量為T(mén)F>Cur>Cy，親和力則為T(mén)F>Cur和cy，而Cur和cy的親和力接近。TF和Cur對(duì)H5熒光猝滅的類(lèi)型為以靜態(tài)反應(yīng)為主，動(dòng)態(tài)反應(yīng)為輔，同時(shí)伴隨有距離作用。而cy導(dǎo)致Histatin5熒光猝滅的類(lèi)型是靜態(tài)猝滅。色素/H5之間的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)為1，意味著每一個(gè)色素分子只會(huì)與一個(gè)H5分子結(jié)合。cy使H5熒光猝滅改變了H5的分子構(gòu)象，使其熒光基團(tuán)所處