肝毒吡咯里西啶生物堿Adonifoline和Senecionine藥物動力學(xué)研究.pdf

1、目的：研究千里光總生物堿的富集工藝及Adonifoline的分離純化工藝, 建立生物樣本中吡咯里西啶生物堿Adonifoline和Senecionine及其代謝產(chǎn)物的定量分析方法，并對Adonifoline和Senecionine及其代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)進(jìn)行研究，為吡咯里西啶生物堿的致毒和解毒機(jī)制研究提供依據(jù)。方法:采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計法優(yōu)化千里光總生物堿的富集工藝并用柱層析色譜法分離制備Adonifoline單體。在Adoni

2、foline和Senecionine大鼠體內(nèi)外代謝產(chǎn)物和代謝途徑研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合固相萃取技術(shù)（SPE）處理血清樣品，以Monocrotaline為內(nèi)標(biāo)，建立超高效液相色譜－質(zhì)譜法（UPLC-MS）同時測定大鼠血清中Adonifoline和Senecionine及其代謝產(chǎn)物的含量，以獲得各種目標(biāo)分析物的血藥濃度-時間曲線，利用PK Solutions 2藥動軟件計算Senecionine和Senecionine的氮氧化物（Senecio

3、nine-NO）、Adonifoline和Adonifoline的氮氧化物（Adonifoline-NO）藥動學(xué)參數(shù)。利用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對藥動參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果：通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到千里光總生物堿富集工藝為千里光乙醇提取物用3倍量的2%鹽酸水溶液捏溶、氨水堿化pH值到10以上后用氯仿萃取5次，得到總生物堿，比色法測定總生物堿含量比提取物中生物堿含量提高417倍。總生物堿用硅膠拌樣后進(jìn)行硅膠柱層析，采用氯仿－甲醇系統(tǒng)分離純

4、化得到Adonifoline（700 mg），純度達(dá)到98%以上。大鼠血清樣品經(jīng)SPE處理后，進(jìn)行UPLC-MS法定量分析。色譜條件：流動相為乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脫；色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18，2.1×50 mm，1.7 μm；色譜柱溫：45℃；進(jìn)樣量：2 μL。質(zhì)譜條件為：Capillary：4.2 kv，Cone：45 v，Extractor：2 v，RF Lens：0.1

5、v，Source Temprature：120 ℃，Desolution Temprature：300 ℃，Gas Flow： Desolution gas：600 L/hr，Cone gas：60 L/hr，LM Resolution：15，Hresolution：15，Ion Energy：0.5，ESI+Mode Scan。采用SIR模式監(jiān)測Senecionine(m/z 336)、Senecionine-NO(m/z 352)、

6、Adonifoline(m/z 366)、Adonifoline-NO(m/z 382)IS, , Monocrotaline（m/z 326)。Senecionine、Senecionine-NO、Adonifoline、Adonifoline-NO分別在0.556－8896 ng/mL，5.84－9344 ng/mL、0.5828－9324.8 ng/mL和24.8－9920 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低定量限（LLOQ）分別

7、為5.56 ng/mL、11.68 ng/mL、5.83 ng/mL和12.40 ng/mL，最低檢測限（LOD）分別為1.390 ng/mL、2.920 ng/mL、1.470 ng/mL和3.10 ng/mL。平均回收率分別為109.8±4.52%，93.6±6.81%，92.1±2.69%，112.8±7.12%。分析方法符合生物樣品分析的要求。大鼠靜脈注射和口服Adonifoline和Senecionine之后，均可在血清中檢測

8、到原型藥物和主要代謝產(chǎn)物Adonifoline-NO和Senecionine-NO。大鼠靜脈注射給藥后，Adonifoline和Adonifoline-NO的消除速度常數(shù)K分別為0.0033 ±0.0012 1/min和0.0038 ±0.0017 1/min；消除半衰期t1/2分別為241.2 ±90.0 min和181.9 ±60.4 min；血藥濃度－時間曲線下面積AUC(0-t)分別為320.0323 ±77.2539 μg·m

9、in/mL和173.0951±71.316 μg·min/mL；體內(nèi)平均注留時間MRT分別為128.4 ±46.5 min和177.6±64.2 min，表觀分布容積Vd分別為4180.0916 ±1171.9706 mL/kg和6417.0678 ±2485.0695 mL/kg，清除率CL分別為12.7405 ±3.4207 mL/min/kg和24.9197± 8.7771 mL/min/kg。大鼠口服Adonifoline低、中

10、、高劑量后Adonifoline和Adonifoline-NO的AUC隨劑量的提高而增大，具有劑量依賴性特征，而其消除半衰期等參數(shù)與劑量無關(guān)。大鼠靜脈注射Senecionine后，Senecionine和Senecionine-NO的t1/2分別為306.33±177.28 min和163.99±105.18 min；AUC(0-t)分別為69.23±24.64 μg·min/mL和302.39±82.55 μg·min/mL；MRT分

11、別為128.33±99.61 min和168..29±41.24 min；Vd分別為10864.55±8736.35 mL/kg和1250.52±850.13 mL/kg，CL為23.23±8.39 mL/min/kg和5.30±2.07 mL/min/kg。大鼠口服低、中、高劑量的Senecionine后，Senecionine和Senecionine-NO的半衰期等參數(shù)與劑量無關(guān)。結(jié)論：本研究建立的UPLC-MS法具有準(zhǔn)確、分析速度