土貝母苷甲對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞增殖與凋亡的影響實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]
　　 1、通過(guò)觀察土貝母苷甲對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞增殖的影響，闡明土貝母苷甲是否對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞有抑制作用；
　　 2、通過(guò)觀察土貝母苷甲對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞的細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期和凋亡以及相關(guān)凋亡基因Bax表達(dá)的影響，為進(jìn)一步闡明土貝母苷甲的抑癌作用提供理論依據(jù)。
　　 [方法]
　　 以加PBS組為空白對(duì)照組，以藥物終濃度為0 uM的細(xì)胞組為陰性對(duì)照組、以藥物終濃度為5、10、1

2、5、20和25 uM為實(shí)驗(yàn)組，分別處理HepG-2細(xì)胞24h，48h和72h后，噻唑藍(lán)(MTT)比色觀察各組藥物對(duì)細(xì)胞的毒性作用，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)土貝母苷甲(5、10、15 uM)對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞周期及凋亡的影響，qRT-PCR檢測(cè)土貝母苷甲(5、10、15 uM)對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞Bax基因的表達(dá)水平的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1、噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)藥物終濃度分別為0、5、10、15、20和25u

3、M的培養(yǎng)基分別處理人肝癌HepG-2細(xì)胞24h，48h和72h后，結(jié)果顯示土貝母苷甲對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞的增殖有劑量-效應(yīng)關(guān)系，隨濃度的升高，抑制率增高，抑制效果大，但無(wú)明顯時(shí)間依賴性(P>0.05)，且15uM組、20uM組和25uM組OD值兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2、流式細(xì)胞儀法檢測(cè)結(jié)果顯示土貝母苷甲作用后可使人肝癌HepG-2細(xì)胞發(fā)生凋亡，直方圖上顯示典型的細(xì)胞凋亡峰，凋亡率分別為1.613％、5

4、.356％、11.230％、24.232％；土貝母苷甲在5、10、15uM濃度時(shí)G0-G1期細(xì)胞數(shù)量明顯高于對(duì)照組，S期細(xì)胞明顯少于對(duì)照組，并呈濃度依賴關(guān)系，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3、qRT-PCR結(jié)果顯示隨藥物濃度的增大，Bax基因表達(dá)量逐漸增加，且實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明土貝母苷甲可能通過(guò)上調(diào)Bax基因表達(dá)誘導(dǎo)人肝癌HepG-2細(xì)胞凋亡。
　　 [

5、結(jié)論]
　　 1、土貝母苷甲對(duì)人肝癌細(xì)胞的增殖有明顯地抑制作用，并隨著作用濃度的增大，抑制作用逐漸增強(qiáng)。
　　 2、流式細(xì)胞儀檢測(cè)可見(jiàn)亞二倍體峰；提示土貝母苷甲有誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡作用。土貝母苷甲可通過(guò)誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡并將細(xì)胞阻滯在G0-G1期，使細(xì)胞不能進(jìn)入S期進(jìn)行DNA合成，最終使瘤細(xì)胞的體外增殖受到抑制。
　　 3、qRT-PCR結(jié)果顯示隨藥物濃度的增大，Bax基因表達(dá)量逐漸增多，說(shuō)明土貝母苷甲可能通過(guò)上