CYLD介導(dǎo)的Fas信號途徑殺傷肺癌細(xì)胞的相關(guān)研究.pdf

1、目的：探討圓柱瘤基因CYLD的上調(diào)表達(dá)通過Fas信號途徑誘導(dǎo)對肺癌細(xì)胞殺傷的結(jié)果及相關(guān)機制。
　　 方法：收集5例患者肺腺癌手術(shù)標(biāo)本，癌組織作為實驗組，自身癌旁組織作為對照組，實時熒光定量PCR進行CYLD基因表達(dá)分析，并進行統(tǒng)計學(xué)檢驗；肺癌細(xì)胞株A549、H460分別進行FLAG-CYLD質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，同樣采取實時熒光定量PCR對轉(zhuǎn)染效果進行分析，并建立穩(wěn)定表達(dá)FLAG-CYLD的A549、H460細(xì)胞株；mFasL蛋白與轉(zhuǎn)染前后

2、的A549、H460細(xì)胞株進行培養(yǎng)，時間為24小時，通過流式細(xì)胞分析Fas信號途徑對A549、H460細(xì)胞的殺傷情況；通過Co-IP及WB分析CYLD蛋白是否使Ub-RIP1蛋白去泛素化，后者是否進一步加入Fas信號誘導(dǎo)形成DISCⅡ，從而誘導(dǎo)對肺癌細(xì)胞(重點分析A549細(xì)胞)的殺傷。
　　 結(jié)果：在檢測的5例患者肺腺癌手術(shù)標(biāo)本中，癌組織和癌旁正常組織均有CYLD表達(dá)，但對照組為實驗組的2.53倍，并有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)

3、；轉(zhuǎn)染后CYLD基因在A549、H460細(xì)胞的表達(dá)較轉(zhuǎn)染前分別高1.40、1.83倍；與mFasL蛋白共培養(yǎng)的A549、H460細(xì)胞，其死亡均較轉(zhuǎn)染前顯著增加，但主要表現(xiàn)在壞死而并非凋亡的增加；肺癌細(xì)胞A549壞死水平的Co-IP及WB分析表明1)RIP1蛋白與CYLD蛋白、caspase-8蛋白之間均相互作用，2)RIP1蛋白與自身同源的另外一種蛋白RIP3結(jié)合，其作用在caspase抑制劑zVAD-fmk預(yù)處理后的肺癌細(xì)胞A549細(xì)