Fas基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合應(yīng)用順鉑對(duì)舌鱗癌細(xì)胞殺傷作用的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建Fas基因真核表達(dá)質(zhì)粒Pbk-Fas并將其轉(zhuǎn)導(dǎo)入舌鱗癌Tca8113細(xì)胞，不同濃度的順鉑作用于轉(zhuǎn)染前后的Tca8113細(xì)胞。探討Fas基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合應(yīng)用順鉑對(duì)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的殺傷作用，以期應(yīng)用較低的順鉑濃度獲得較大的細(xì)胞殺傷和凋亡誘導(dǎo)作用，減少大劑量藥物應(yīng)用帶來的毒性，為臨床口鱗癌Fas基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期淋巴細(xì)胞，用RT-PCR反轉(zhuǎn)錄成Cdna擴(kuò)增Fas基因全長(zhǎng)，亞克隆到真核表達(dá)載

2、體Pbk-CMV內(nèi)，構(gòu)建出重組真核表達(dá)質(zhì)粒Pbk-Fas。脂質(zhì)體法將Pbk-Fas轉(zhuǎn)染Tca8113細(xì)胞。取已轉(zhuǎn)導(dǎo)入構(gòu)建好Fas基因真核表達(dá)質(zhì)粒Pbk-Fas的舌鱗癌Tca8113細(xì)胞，將其分為未轉(zhuǎn)染Fas基因組，轉(zhuǎn)染Fas基因兩組，每組1×105/ml各100μl。將2組細(xì)胞分別接種至96孔板，加入100μl順鉑，使其最終濃度分別為1，5，10，20，40μg/ml，用MTT法檢測(cè)順鉑對(duì)轉(zhuǎn)染前后Tca8113細(xì)胞的抑制率，流式細(xì)胞儀測(cè)

3、定轉(zhuǎn)染前后不同濃度順鉑誘導(dǎo)Tca8113細(xì)胞的凋亡。
　　 結(jié)果：
　　 1.Fas基因真核表達(dá)質(zhì)粒Pbk-Fas成功構(gòu)建，重組質(zhì)粒Pbk-Fas經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定，表明均含有大小正確的Fas基因片段。
　　 2.MTT法檢測(cè)細(xì)胞抑制率的結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組 Tca8113細(xì)胞的增殖抑制作用隨著鉑濃度的升高而升高，分別為57.39％±0.27％，61.81％±0.28％，67.08％±0.25％，75.44％±.030％

4、，78.33％±0.23％，未轉(zhuǎn)染組Tca8113細(xì)胞分別為29.60％±0.27％，33.00％±.0.35％，37.88％±0.36％，41.43％±0.27％，47.15％±0.25％。與未轉(zhuǎn)染組比較，差異有顯著性（P<0.01），表明Fas基因轉(zhuǎn)染能增加順鉑對(duì)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖抑制率。
　　 3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)的結(jié)果顯示：未轉(zhuǎn)染組的Tca8113細(xì)胞的凋亡率分別為7.3％±0.2％，11.2％±0.3％，12

5、.3％±0.5％，13.4％±0.5％，14.6％±0.3％％；轉(zhuǎn)染組的Tca8113細(xì)胞的凋亡率分別為11.4％±0.2％，25.2％±0.6％，31.3％±0.4％，37.4％±1.2％，38.6％±1.4％。對(duì)未轉(zhuǎn)染組，順鉑加入對(duì)Tca8113細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），終濃度為1，5，10，20μg/ml的順鉑誘導(dǎo)Tca8113誘導(dǎo)凋亡有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。順鉑對(duì)轉(zhuǎn)染后的Tca8113細(xì)胞有更明顯的誘