重要病毒蛋白對雙鏈RNA依賴性激酶PKR抑制作用的體外分析.pdf

1、雙鏈RNA依賴的蛋白激酶PKR屬于絲/蘇蛋白激酶亞家族成員，它被激活后會形成同源二聚體，發(fā)生自身磷酸化，隨后將其底物磷酸化，在細胞信號轉導及細胞生長、分化、凋亡過程中發(fā)揮重要作用。其中PKR最突出的作用是在天然免疫方面，例如病毒感染宿主細胞后，通過磷酸化eIF2α來抑制mRNA的翻譯，引起蛋白合成終止。為了抵御宿主這種免疫調控，病毒進化出相應策略來抑制該過程：其中流感病毒NS1蛋白可以抑制PKR的激活，Ⅰ型單純皰疹病毒(HSV-1)的I

2、CP34.5則能夠介導eIF2α脫磷酸化。為了探明這種機制，我們對這些病毒蛋白與PKR、eIF2α的相關作用進行了初步研究。
　　 本論文研究中利用原核細胞大腸桿菌表達重組蛋白、并通過親和層析和離子交換層析等技術手段純化了PKR、eIF2α和禽流感NS1蛋白，建立了體外檢測PKR活性和eIF2α脫磷酸化作用的實驗體系，并檢測了高致病性禽流感病毒的NS1蛋白和HSV-1的ICP34.5對其相關影響。實驗表明：在體外，NS1蛋白能夠