VEGF干擾性RNA對鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用.pdf

1、目的：探討血管內皮生長因子(Vascular endothelia growth factor,VEGFl65)小干擾RNA(small interference,siRNA)對鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。 方法：①采用Smith的方法，將出生后7d的C57BL/6J小鼠置于氧艙，控制氧濃度75％±3％，5天后回到正常氧環(huán)境，喂養(yǎng)7天后處死；采用異硫氰酸熒光素.葡聚糖(FITC-Dextran)熒光造影視網(wǎng)膜鋪片觀察視網(wǎng)膜新生血

2、管的形態(tài)，鑒定視網(wǎng)膜新生血管模型；②將出生后7d的8只小鼠于空氣中喂養(yǎng)，為正常組。③另24只出生后7d的小鼠放入75％±3％的高氧環(huán)境中(同Smith方法)，5d后出艙并隨機分為3組：對照組、空載體組和基因治療組。出艙當天，空載體組小鼠玻璃體腔內注射空載體pSilencer2.1-U6 hygro，基因治療組注射VEGF<,165>siRNA表達質粒pSilencer2.1-U6 hygro，均采用脂質體介導。對照組小鼠不作任何處理。④

3、注射后7d，采用FITC-Dextran熒光造影視網(wǎng)膜鋪片觀察視網(wǎng)膜新生血管的形態(tài)變化，采用免疫組織化學方法檢測視網(wǎng)膜中VEGF的表達差異，采用常規(guī)病理切片統(tǒng)計突破內界膜的血管內皮細胞細胞核數(shù)。 結果：①熒光造影視網(wǎng)膜鋪片發(fā)現(xiàn)，正常組整個視網(wǎng)膜血管分布呈規(guī)則均勻的網(wǎng)狀結構。對照組和空載體組視網(wǎng)膜血管不規(guī)則擴張，中周邊部有大量血管新生?；蛑委熃M后極部視網(wǎng)膜血管迂曲及不規(guī)則擴張較對照組和空載體組明顯減輕。②免疫組織化學染色顯示，正

4、常組視網(wǎng)膜中VEGF呈弱陽性表達；對照組和空載體組視網(wǎng)膜中VEGF呈強陽性表達?；蛑委熃M與對照組和空載體組相比較，VEGF的表達明顯減少。③病理切片顯示，正常組很少見到突破視網(wǎng)膜內界膜的內皮細胞細胞核，而對照組和空載體組中均有大量，其發(fā)生率為100％。基因治療組(6.83±4.72)較對照組(11.57±5.85)和空載體組(11.53±6.15)明顯減少。統(tǒng)計學分析表明，除對照組和空載體組間差異無統(tǒng)計學意義外(P>0.05)，其余各