超聲介導(dǎo)SonoVue微泡轉(zhuǎn)IFN-γ基因抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文旨在應(yīng)用超聲介導(dǎo)微泡破裂轉(zhuǎn)基因的方法，研究體內(nèi)外抗腫瘤作用的效果及可行性，為腫瘤的基因治療提供新的思路。首先以聲諾維(SonoVue)微泡作為轉(zhuǎn)基因載體，pcDNA3/IFN-γ質(zhì)粒為治療基因，體外通過超聲介導(dǎo)微泡破裂法轉(zhuǎn)基因作用于人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721，錐蟲藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞的安全性，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清IFN-γ的表達(dá)水平，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因后細(xì)胞周期變化。結(jié)果表明，超聲微泡轉(zhuǎn)基因組的細(xì)胞存活率與對(duì)照組

2、無差別，細(xì)胞上清中IFN-γ有較高表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡比例明顯高于無微泡對(duì)照組。然后以SMMC-7721細(xì)胞接種至裸鼠皮下成瘤，以pcDNA3/IFN-γ質(zhì)粒為靶基因，比較有無超聲或微泡及聯(lián)合作用時(shí)抗腫瘤效果，治療結(jié)束后，ELISA及免疫組化法分別檢測(cè)血清和瘤組織的IFN-γ的表達(dá)，并比較瘤重、瘤體積及瘤組織的變化，結(jié)果表明，超聲微泡轉(zhuǎn)基因組的移植瘤體積及瘤重較其他組增長(zhǎng)最小(F=27.753,p＜0.01)；瘤組織中IFN-γ的表達(dá)

3、及血清中IFN-γ的水平最高(F=88.969,p＜0.01)；組織學(xué)顯示移植瘤有片狀壞死和炎細(xì)胞浸潤。再建立經(jīng)SD大鼠門靜脈置管動(dòng)物模型，以蟲熒光素酶基因?yàn)閳?bào)告基因，觀察輸入不同濃度的SonoVue微泡作為載體促進(jìn)蟲熒光素酶基因在肝臟中的表達(dá)強(qiáng)度與持續(xù)時(shí)間，并檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染前后的肝腎功能，并取肝、腎組織常規(guī)HE染色行組織學(xué)檢查。結(jié)果表明：隨著微泡濃度的增加，蟲熒光素酶基因表達(dá)逐漸增加，呈量效關(guān)系，并有較長(zhǎng)時(shí)間的表達(dá)。轉(zhuǎn)染前后的肝腎功能(

4、AST、ALT、ALB、BUN、Cr)無明顯變化，HE切片未發(fā)現(xiàn)肝腎組織結(jié)構(gòu)的異常改變。最后，以Walker256瘤株接種Wistar大鼠的肝臟建立肝轉(zhuǎn)移瘤模型，通過門靜脈置管途徑應(yīng)用超聲介導(dǎo)微泡破裂法轉(zhuǎn)IFN-γ基因，免疫組化檢測(cè)瘤組織中IFN-γ的表達(dá)，并行組織學(xué)檢查，F(xiàn)CM檢測(cè)轉(zhuǎn)基因后轉(zhuǎn)移瘤凋亡變化。結(jié)果表明：轉(zhuǎn)基因治療后，治療后采用免疫組化示瘤組織及周圍肝組織有IFN-γ的表達(dá)，HE切片見瘤組織有片狀壞死，并有巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞