低頻超聲聯(lián)合微泡提高前列腺癌微環(huán)境中抗腫瘤免疫效應(yīng)的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究揭示血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在前列腺癌微環(huán)境中對樹突狀細(xì)胞分化的潛在影響；并通過低頻超聲聯(lián)合微泡抑制前列腺癌RM-1細(xì)胞中的VEGF表達(dá)，探究DCs和脾源性T細(xì)胞的表型改變及其與低頻超聲在前列腺癌微環(huán)境中的協(xié)同抗腫瘤作用。
　　方法：首先檢測小鼠前列腺癌RM-1細(xì)胞中VEGF mRNA的表達(dá)水平，采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的方法下調(diào)其表達(dá)，并與BALB/c小鼠

2、骨髓源性DCs共培養(yǎng)，通過DCs表型改變判斷成熟狀態(tài)及變化。隨后采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化低頻超聲聯(lián)合微泡抑制RM-1血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的最佳參數(shù)組合，并在細(xì)胞膜損傷和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行分組驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。最后采用尼龍毛柱法獲取BALB/c小鼠脾源性T細(xì)胞，與低頻超聲聯(lián)合微泡輻照后的RM-1和骨髓源性DCs共培養(yǎng)后通過免疫細(xì)胞的表型改變判斷其分化狀態(tài)。并從抑制RM-1細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力、細(xì)胞增殖能力和侵襲能力三個(gè)方面初步探究體外低頻超聲聯(lián)合微泡協(xié)同前列

3、腺癌微環(huán)境中抗腫瘤免疫的作用。
　　結(jié)果：小鼠骨髓源性DCs與RM-1共培養(yǎng)后CD11c和CD83表達(dá)陽性率均有所下降；采用下調(diào)VEGF表達(dá)后的RM-1共培養(yǎng)，可提高CD83(+)DCs比例；根據(jù)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)可知，抑制RM-1中VEGF表達(dá)的最優(yōu)聲空化參數(shù)組合為：超聲頻率800kHz，超聲功率360mW/cm2，輻照時(shí)間30s，微泡/細(xì)胞懸液體積比20%。尼龍毛柱法可獲得小鼠脾源性T淋巴細(xì)胞，與RM-1和DCs共培養(yǎng)后，免疫細(xì)胞中

4、CD11c、CD83、CD4、和CD8a的表達(dá)水平均有所降低，而共培養(yǎng)前采用低頻超聲聯(lián)合微泡輻照RM-1可提高共培養(yǎng)體系中CD11c（+）DCs和CD8a（+）T淋巴細(xì)胞的比例；且輻照并與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)后，RM-1細(xì)胞遷移數(shù)量最少、增殖和侵襲能力最弱。
　　結(jié)論：小鼠前列腺癌微環(huán)境中DCs和成熟DCs的分化均受到抑制，而下調(diào)VEGF的表達(dá)可以促進(jìn)成熟DCs的分化。低頻超聲聯(lián)合微泡可顯著抑制小鼠前列腺癌細(xì)胞RM-1中VEGF表達(dá)，并