基于非培養(yǎng)方法的油頁巖礦區(qū)細(xì)菌多樣性研究.pdf

1、本研究以遼寧撫順、吉林樺甸和廣東茂名三大典型油頁巖礦區(qū)為研究對象，采用從油頁巖樣品中直接提取微生物總DNA，構(gòu)建細(xì)菌16S rDNA克隆文庫，并結(jié)合熒光原位雜交技術(shù)研究油頁巖細(xì)菌和古細(xì)菌的豐度及空間分布，了解我國主要油頁巖礦藏中優(yōu)勢微生物群落的結(jié)構(gòu)組成、數(shù)量以及空間分布變化。
　　分別采用SDS高鹽提取法、SDS液氮研磨法、SDS反復(fù)凍融法、SDS異硫氰酸胍法和試劑盒提取法對各礦區(qū)微生物總DNA進(jìn)行提取。結(jié)果表明，各方法提取效果差

2、異很大，其中，SDS高鹽提取法效果最好，得到約23kb較完整片段，DNA純度也滿足后繼分子操作要求，該法適合油頁巖樣品。SDS液氮研磨和SDS反復(fù)凍融提取法僅能提取到部分樣品總DNA，且產(chǎn)率和純度較低，而SDS異硫氰酸胍和試劑盒提取法則無DNA提出，不適合此類樣品。
　　各礦區(qū)細(xì)菌16S rDNA克隆文庫表明，遼寧撫順、吉林樺甸和廣東茂名礦區(qū)文庫的覆蓋率分別55.05％、73.42％、90.12％，三個文庫中變形細(xì)菌門均為主要類群

3、，在各礦區(qū)占有絕對優(yōu)勢。三個礦區(qū)共同具有的門類還有擬桿菌門、放線菌門和厚壁菌門;在撫順礦和茂名礦還存在酸桿菌門和未分類細(xì)菌;異常球菌-棲熱菌門僅在撫順礦中發(fā)現(xiàn)。各礦區(qū)在門的分類層面上，差異較小;在屬的分類層面上，差異較明顯。
　　各礦區(qū)礦層細(xì)菌和古細(xì)菌FISH檢測表明，細(xì)菌在各礦區(qū)礦層中所占比例均大于50％，古細(xì)菌在各礦層中所占比例較低，除在撫順新鮮油頁巖中占4.53％，風(fēng)化油頁巖中占2.25％以外，在其余礦層中所占比例均不足1％