蝦蟹混養(yǎng)池細菌多樣性的研究.pdf

1、本論文針對當前海水養(yǎng)殖環(huán)境微生物作用研究的熱點問題，首次將PCR-DGGE技術引入到我國蝦蟹混養(yǎng)池微生物生態(tài)學的研究領域，優(yōu)化了蝦蟹混養(yǎng)池沉積物的總DNA提取方法及DGGE分離方法，并結合傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)方法對泉州灣灘涂蝦蟹混養(yǎng)池的沉積物及水體的理化因子、細菌數(shù)量及細菌多樣性隨養(yǎng)殖時間推移的動態(tài)變化及空間上的變化進行了研究，同時對沉積物細菌總DNA的DGGE圖譜的16Sr DNA片段的主要亮帶進行克隆、測序。研究取得以下主要結果：

2、 1.沉積物總DNA提取的方法：先以TENP緩沖液去除沉積物中的腐殖酸，繼之以溶菌酶-SDS溫和裂解，其提取效率達90％以上，所獲DNA產量達2-20μg/g濕重沉積物，片段大小均在23 kb左右，不經純化即可直接進行PCR擴增和限制性酶切等分子生物學操作。 2.DGGE分離方法：采用對大多細菌的16S rRNA基因V3區(qū)具有特異性的引物對GC-341F和517R，以普通Taq酶進行PCR擴增，將長約200bp的擴增產物使用變性

3、劑濃度梯度為40％到60％的8％的聚丙烯酰胺凝膠進行分離，最后對電泳譜圖進行分析，得出其中細菌多樣性的信息。 3.檢測池在整個養(yǎng)殖期，理化因子都在對蝦養(yǎng)殖耐受范圍內，呈波動狀態(tài)，不存在明顯的規(guī)律；沉積物中的總菌數(shù)(DAPI計數(shù))隨著養(yǎng)殖時間的推移呈波動狀態(tài)、總體呈上升趨勢，與總有機碳呈明顯的相關性；水體及沉積物中的異養(yǎng)菌數(shù)、弧菌總數(shù)都呈波動狀態(tài)、總體呈下降趨勢，與水溫、溶解氧、總氮、磷酸鹽等環(huán)境因子相關性不明顯。 4.新

4、舊池水體及沉積環(huán)境都存在豐富的細菌多樣性，但相對而言，放苗前和養(yǎng)成前期均較低，從養(yǎng)成中期開始逐漸升高，養(yǎng)成末期又有所下降；其細菌群落結構在整個養(yǎng)殖期處于動蕩變化狀態(tài)；沉積物細菌多樣性較水體的豐富且穩(wěn)定性較好；DGGE法研究蝦池的群落結構變化與可培養(yǎng)異養(yǎng)菌數(shù)的變化之間沒有明顯的相關性。 5.對沉積物DGGE圖譜上的特征條帶進行回收測序，測序結果為：γ-變形桿菌亞群、δ-變形菌亞群、擬桿菌群、厚壁菌群、放線菌群、綠彎菌群和一些未知菌