在低氧條件下siRNA干擾HIF-2α對前列腺癌PC-3細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　1.在培養(yǎng)基中加入氯化鈷(CoCl2)模擬缺氧環(huán)境培養(yǎng)細胞,以觀察低氧條件下缺氧誘導(dǎo)因子-2α(Hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)在人前列腺癌細胞PC-3中的表達。
　　2.利用CoCl2建立的低氧模型,觀察HIF-2α干擾對前列腺癌細胞PC-3中HIF-2α表達及其增殖和凋亡的影響。
　　方法:
　　1.在培養(yǎng)基中加入CoCl2模擬缺氧,用MTT法檢測CoCl2對

2、PC-3細胞的抑制情況;采用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測CoCl2與HIF-2α的mRNA轉(zhuǎn)錄的量-效和時-效關(guān)系,從而為腫瘤細胞的缺氧模型選擇一個最佳的作用濃度和最佳的作用時間。
　　2.將實驗分成常氧組、低氧組、低氧+脂質(zhì)體組、低氧+HIF-2αsiRNA組,用RT-PCR方法檢測48h各組中HIF-2α的mRNA水平;蛋白印跡實驗(Western blotting)檢測前列腺癌細胞PC-3中HIF-2α蛋白的表達;MTT

3、法檢測沉默HIF-2α基因?qū)毎L的影響;利用流式細胞儀檢測細胞的凋亡。
　　結(jié)果:
　　1.100μmol/LCoCl2作用48h可作為最佳前列腺癌細胞PC-3缺氧模型。
　　2.各實驗組都存在HIF-2α的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達,加CoCl2組HIF-2αmRNA水平和蛋白質(zhì)水平較常氧組顯著增高(P<0.05);低氧+HIF-2αsiRNA組,HIF-2αmRNA水平和蛋白水平較低氧和低氧+空脂質(zhì)體組顯著降低(

4、P<0.05);低氧+空脂質(zhì)體組較低氧組HIF-2αmRNA水平和蛋白水平無顯著增高(P>0.05);加CoCl2組較常氧組細胞增殖活力和凋亡無明顯差異(P>0.05);低氧+HIF-2αsiRNA組細胞的增殖活力降低凋亡增加較低氧組、低氧+空脂質(zhì)體組(P<0.05);低氧與低氧+空脂質(zhì)體組細胞的增殖和凋亡無明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.CoCl2可誘導(dǎo)前列腺癌PC-3細胞缺氧使HIF-2α的mRNA高表達