唾液中氫化可的松的檢測及在兒童心理應(yīng)激研究中的應(yīng)用.pdf

1、腎上腺皮質(zhì)激素氫化可的松(皮質(zhì)醇Cor)是維持生命的必需激素,體內(nèi)含量的多少對物質(zhì)代謝,血管反應(yīng),神經(jīng)系統(tǒng),免疫功能及炎癥反應(yīng)有不同程度的影響。腎上腺皮質(zhì)激素水平低下,人體對外來損傷性刺激或劇烈環(huán)境變化的適應(yīng)能力將大大降低。在精神生物學(xué)研究中,氫化可的松是一種非常重要的激素,它被稱為“壓力荷爾蒙”,人體面臨生理、心理刺激時其分泌量增高(應(yīng)激反應(yīng))。受檢測方法限制,目前多采用血液Cor作為檢測指標,然而采血樣,本身是一種急性應(yīng)激源,亦可能

2、造成血液Cor上升。唾液Cor(SF)無創(chuàng)性的采樣避免抽血應(yīng)激,此外可頻繁多次收集,病人可在家中自行留取樣本,尤其適用于兒童,能夠反映血清游離Cor(FF)水平,大量研究表明SF/FF的比值約為0.5,并且SF值與FF值呈高度相關(guān),所以采用唾液CorSF)作為檢測指標更加能反映實際情況,檢測結(jié)果也更為可靠。 本文在以下三個方面進行了研究：(1)對唾液樣本中氫化可的松的提取方法及氫化可的松硫酸衍生產(chǎn)物的提取方法進行研究；(2)建立

3、靈敏準確地測定唾液中氫化可的松的方法；(3)生物樣本的測定,考察唾液氫化可的松測定法在兒童心理應(yīng)激研究中應(yīng)用的可行性。 本課題的研究將為精神生物學(xué)、腦科學(xué)以及疾病診斷等研究提供一種研究手段。 論文主要工作如下： 一、生物樣本中目標物前處理方法的研究 采用本實驗室研究的幾種納米纖維作為固相萃取柱的吸附劑,研究了水基質(zhì)中的六種甾體化合物的提取效率,并在此基礎(chǔ)上選擇提取效率較高的聚苯乙烯(PS10％)電紡納米纖

4、維作為吸附劑研究了唾液樣本中氫化可的松和醋酸可的松的提取情況。 唾液氫化可的松測定法中需要兩次提取過程,本論文成功的在二次提取過程中以聚苯乙烯(PS10％)電紡納米纖維為萃取介質(zhì)填裝固相微萃取小柱,取代文獻傳統(tǒng)的溶劑提取法,提取強酸衍生液中的目標物,提取同收效率可達100％。解決了常規(guī)提取方法提取回收率低、凈化效果差的缺點,不僅使得檢測靈敏度增高、干擾減少,而且提取過程簡便、快速、環(huán)保。 二、建立柱前衍生化-高效液相色譜

5、法測定氫化可的松的方法及其評價 氫化可的松本身具有紫外吸收,可以直接用紫外檢測器檢測,但是由于唾液樣本中氫化可的松的含量比血液及尿液中的含量低約兩個數(shù)量級,早晨的含量約為1.0-8.0ng/mL,夜晚則更低只有0.0-1.0ng/mL左右。而紫外檢測法的檢出限不足以達到唾液中氫化可的松含量檢測的要求,所以采用紫外檢測法來定量分析唾液樣本比較困難。因此選用柱前衍生試劑--硫酸/乙醇溶液,先將氫化可的松衍生為具有較強熒光強度的衍生物

6、,然后通過測定氫化可的松衍生產(chǎn)物的熒光強度對氫化可的松進行定量分析。本文建立了準確的、靈敏的測定唾液中氫化可的松的高效液相色譜法。色譜柱為迪馬C18(4.6×250mm,5um),硫酸/乙醇溶液為柱前衍生試劑,流速為1.0mL/min,熒光檢測器檢測。氫化可的松在0.01～20ng/mL范圍內(nèi),線性關(guān)系良好(r=0.9991),本方法簡便、快速、準確,可用于唾液中氫化可的松的測定。 三、氫化可的松衍生產(chǎn)物結(jié)構(gòu)質(zhì)譜分析 通

7、過液相制備氫化可的松兩個硫酸衍生產(chǎn)物的單體,經(jīng)質(zhì)譜儀分析得到兩個衍生產(chǎn)物中質(zhì)譜豐度較高的碎片離子峰,結(jié)合參考文獻的研究,初步推斷了兩個衍生產(chǎn)物的衍生過程。二號衍生產(chǎn)物的衍生過程與文獻報道的一致,一號衍生產(chǎn)物經(jīng)歷了磺酸化的過程,此研究發(fā)現(xiàn)尚未見文獻報道。 四、唾液氫化可的松測定法在兒童心理應(yīng)激試驗中應(yīng)用可行性初步研究 為驗證唾液氫化可的松測定法在兒童心理應(yīng)激試驗中應(yīng)用的可行性,用建立的檢測方法測定了正常人和心理試驗中被試兒