99mTc-MIBI在檢測(cè)肺癌細(xì)胞耐藥及逆轉(zhuǎn)中的獨(dú)特價(jià)值.pdf

1、背景和目的：
　　 各種惡性腫瘤中，肺癌的發(fā)病率及病死率在世界上占首位，由于多數(shù)患者到醫(yī)院就診時(shí)，已失去了外科手術(shù)的最佳時(shí)機(jī)，化療作為唯一的全身治療的手段，顯得尤為重要。盡管隨著化療方案的改進(jìn)及新藥的不斷研發(fā)，臨床化療效果越來(lái)越好，但腫瘤對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性是至今仍難以解決的主要問題。腫瘤的多藥耐藥(multidrugresistance,MDR) 是導(dǎo)致臨床上化療失敗的主要原因。紫杉醇(paclitaxel)作為一種新型的抗腫

2、瘤藥物，在肺癌的治療上已顯示出良好的發(fā)展前景。然而，其耐藥性的產(chǎn)生以及越來(lái)越多交叉耐藥現(xiàn)象的出現(xiàn)，已成為一個(gè)不容忽視的難題。
　　 多年以來(lái)，腫瘤耐藥性的檢測(cè)及腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑（MDRreversal agents）的研究已有很大的突破。目前腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑已發(fā)展到第三代，但由于劑量限制性毒性作用，其臨床應(yīng)用受到限制。同時(shí)臨床上也缺少一種簡(jiǎn)便、快速而又準(zhǔn)確的檢測(cè)腫瘤耐藥性的方法。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)99m锝-甲氧基異丁基異腈(te

3、chnetium-99mmethoxyisobutyl isonitrile，99mTc-MIBI)與某些天然來(lái)源的抗腫瘤藥物有相同的生物學(xué)特性，并被認(rèn)為是P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）及多藥耐藥相關(guān)蛋白（multidrug-resistance relatedprotein ，MRP）等的底物之一，它進(jìn)入細(xì)胞之后可以被P-gp及MRP等識(shí)別并泵出，所以99mTc-MIBI的滯留和清除情況能夠反映與多藥耐藥相關(guān)的藥

4、物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)情況及活性。
　　 80多年前，Warburg發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞葡萄糖攝取增加，并能在有氧條件下產(chǎn)生乳酸，被稱為Warburg效應(yīng)或有氧糖酵解?，F(xiàn)在正電子發(fā)射成像（positron emission tomography，PET）已證實(shí)大多數(shù)腫瘤存在葡萄糖攝取增加、代謝增強(qiáng)的現(xiàn)象。有研究發(fā)現(xiàn)，某些糖酵解抑制劑能夠增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，改善腫瘤化療效果，二氯乙酸鹽（dichloroacetate，DCA)作為一

5、種小分子糖代謝調(diào)節(jié)劑，受到廣泛關(guān)注。
　　 本研究旨在探討99mTc-MIBI在人肺腺癌細(xì)胞株A549及其紫杉醇耐藥株A549/Taxol中的攝取差異與肺癌耐藥性之間的關(guān)系，以及二氯乙酸鹽（DCA）作用后耐藥株A549/Taxol對(duì)紫杉醇的耐藥性變化。
　　 方法：
　　 應(yīng)用抗腫瘤藥物紫杉醇（paclitaxel）以體外濃度遞增和短時(shí)作用法篩選A549 細(xì)胞株。用CCK-8 法檢測(cè)紫杉醇（paclitaxel）

6、對(duì)親代A549 細(xì)胞和耐藥A549/Taxol 細(xì)胞的IC50 及耐藥指數(shù)，檢測(cè)不同濃度DCA 對(duì)細(xì)胞株A549/Taxol 的抑制率，確定其對(duì)細(xì)胞的低毒濃度，檢測(cè)DCA 作用下紫杉醇對(duì)兩株細(xì)胞的IC50 及耐藥指數(shù)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、β-tubulin 等耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)。Γ計(jì)數(shù)器檢測(cè)兩株細(xì)胞在早期（15min）和延遲（120min）對(duì)99mTc-甲氧基異丁基異腈的攝取計(jì)數(shù)值，檢測(cè)

7、DCA 作用下兩株細(xì)胞對(duì)99mTc-MIBI 攝取差異。
　　 結(jié)果：
　　 紫杉醇對(duì)A549、A549/Taxol的IC50分別為10.39 、208.54 μg/L，耐藥指數(shù)為20.07；DCA≤10 mmol/L時(shí)，對(duì)A549/Taxol細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用，10mmol/L DCA處理后紫杉醇對(duì)A549、A549/Taxol的IC50分別為10.11、48.68 μg/L，耐藥指數(shù)為4.82，與紫杉醇單獨(dú)作用時(shí)的耐

8、藥指數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。A549和A549/Taxol對(duì)99mTc-MIBI的清除率分別為-124％和62％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；未加DCA處理與10mmol/L DCA處理A549/Taxol對(duì)99mTc-MIBI清除率分別為68.3％和31.2％，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而未加DCA處理與10mmol/L DCA處理A549對(duì)99mTc-MIBI清除率分別為-111.0％和-122.8