PD-L1反義寡核苷酸對結(jié)腸癌CT26細(xì)胞肝臟轉(zhuǎn)移影響的初步研究.pdf

1、目的：探討PD-L1反義寡核苷酸對結(jié)腸癌CT26細(xì)胞系肝轉(zhuǎn)移影響。 方法：采用免疫組化S-P法檢測大腸癌組織PD-L1表達(dá)，免疫熒光法檢測大腸癌組織局部CD4<'+>、CD8<'+>淋巴細(xì)胞數(shù)目，并分析PD-L1表達(dá)與CD4<'+>、CD8<'+>淋巴細(xì)胞浸潤之間的相關(guān)性。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測PD-L1反義寡核苷酸處理后腫瘤細(xì)胞PD-L1的表達(dá)情況。同時采用小鼠結(jié)腸腺癌CT26細(xì)胞系肝轉(zhuǎn)移模型，通過腫瘤細(xì)胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染PD-L

2、1反義寡核苷酸、腹腔注射PD-L1反義寡核苷酸兩種方式，觀察PD-L1反義寡核苷酸處理后結(jié)腸癌CT26細(xì)胞肝臟轉(zhuǎn)移癌結(jié)節(jié)數(shù)量的變化。 結(jié)果：1．55例大腸癌組織中，PD-L1陽性表達(dá)29例(29/55，52.7％)，明顯高于對照腸黏膜(1/10，10％)，X<'2>檢驗，差異具顯著性(P<0.05)；在伴有癌轉(zhuǎn)移的33例病例中，PD-L1陽性表達(dá)22例(22/33，66.7％)，而22例不伴有癌轉(zhuǎn)移病例中，PD-L1陽性表達(dá)7例

3、(7/22，31.8％)，PD-L1蛋白表達(dá)在伴癌轉(zhuǎn)移者高于不伴癌轉(zhuǎn)移者，X<'2>檢驗分析，差別具顯著性(P<0.05)。但PD-L1表達(dá)在其它各臨床病理因素如年齡、性別、病理學(xué)分級、漿膜浸潤等之間無明顯差異(P>0.05)。55例大腸癌組織中，PD-L1陽性者腫瘤局部CD4<'+>淋巴細(xì)胞和CD8<'+>淋巴細(xì)胞數(shù)分別為12.241±3.181、25.931±4.390；PD-L1陰性者腫瘤局部CD4<'+>淋巴細(xì)胞和CD8<'+>

4、淋巴細(xì)胞數(shù)分別為29.077±524、68.539±5.405，Spearman相關(guān)分析，腫瘤PD-L1表達(dá)與腫瘤局部CD4<'+>、CD8<'+>淋巴細(xì)胞數(shù)均呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。 2．PD-L1反義寡核苷酸及隨機(jī)寡核苷酸分別轉(zhuǎn)染入小鼠結(jié)腸癌CT26細(xì)胞后，RT-PCR結(jié)果顯示腫瘤細(xì)胞PD-L1/β-actin比值分別為0.041±0.002、0.524±0.022，抑制率為93％、14．3％，空白對照組(未經(jīng)任何處理)結(jié)腸癌CT

5、26細(xì)胞PD-L1/β-actin比值為0.612±0.015。PD-L1反義寡核苷酸CT26細(xì)胞轉(zhuǎn)染組PD-L1/β-actin比值與隨機(jī)寡核苷酸轉(zhuǎn)染組及空白對照組相比較，經(jīng)單因素方差分析，差別具顯著性(P<0.05)。將PD-L1反義寡核苷酸及隨機(jī)寡核苷酸轉(zhuǎn)染后的結(jié)腸癌CT26細(xì)胞分別接種于BalB/c小鼠脾臟，14天后，取脾臟原發(fā)灶，RT-PCR檢測各自PD-L1表達(dá)并與空白對照組(未經(jīng)轉(zhuǎn)染的結(jié)腸癌CT26細(xì)胞)進(jìn)行比較，空白對照

6、組、隨機(jī)寡核苷酸轉(zhuǎn)染處理組、PD-L1反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染組，PD-L1/β-actin比值分別為0.615±0.01、0.505±0.005、0.141±0.007，抑制率分別為0％、17.9％、77％。PD-L1反義寡核苷酸細(xì)胞轉(zhuǎn)染組：PD-L1/β-actin比值與隨機(jī)寡核苷酸轉(zhuǎn)染組及空白對照組相比較，經(jīng)單因素方差分析，差別具顯著性(P<0.05)。在小鼠肝轉(zhuǎn)移模型中，PD-L1反義寡核苷酸CT26細(xì)胞轉(zhuǎn)染組、隨機(jī)寡核苷酸轉(zhuǎn)染組及空白

7、對照組肝臟表面轉(zhuǎn)移癌結(jié)節(jié)數(shù)量分別為6.833±4.021、41.500±8.916、46.000±11.541，PD-L1反義寡核苷酸CT26細(xì)胞轉(zhuǎn)染組明顯少于隨機(jī)寡核苷酸轉(zhuǎn)染組及空白對照組，經(jīng)單因素方差分析，差別具顯著性(P<0.01)。將結(jié)腸癌CT26細(xì)胞接種于BalB/c小鼠脾臟，每24h腹腔注射PD-L1反義寡核苷酸及隨機(jī)寡核苷酸，14天后，分別取脾臟原發(fā)灶，RT-PCR檢測PD-L1表達(dá)，PD-L1反義寡核苷酸腹腔注射組、隨機(jī)

8、寡核苷酸腹腔注射組PD-L1/β-actin比值分別為0.197±0.008、0.528±0.008，抑制率分別為68％、14.1％，注射PD-L1反義寡核苷酸組與注射隨機(jī)寡核苷酸組和空白對照組(未進(jìn)行任何注射)比較，經(jīng)單因素方差分析，差別具顯著性意義(P<0.05)。PD-L1反義寡核苷酸腹腔注射組、隨機(jī)寡核苷酸腹腔注射組及空白對照組肝臟表面轉(zhuǎn)移癌結(jié)節(jié)數(shù)量分別為7.500±1.871、41.833±7.083、46.000±11.54

9、l，PD-L1反義寡核苷酸腹腔注射組肝轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)明顯少于隨機(jī)寡核苷酸注射組及空白對照組，經(jīng)單因素方差分析，差別具顯著性(P<0.01)。兩種處理方式PD-L1表達(dá)及肝轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)，經(jīng)t檢驗，差別無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論：本研究結(jié)果提示：1人大腸癌組織表達(dá)PD-L1較對照腸黏膜增高，且與大腸癌轉(zhuǎn)移有關(guān)； 2大腸癌組織PD-L1對CD4<'+>、CD8<'+>淋巴細(xì)胞在腫瘤局部的聚集可能具有抑制作用；3 PD-L1反義寡核苷酸