免疫抑制劑對腎毒血清性腎炎大鼠腎組織中TNF-α與NF-κB表達的影響.pdf

1、目的：探討免疫抑制劑麥考酚酸嗎乙酯、來氟米特和他克莫司對大鼠腎毒血清性腎炎的干預治療作用；探討腎毒血清性腎炎大鼠腎組織中TNF-α、NF-κB表達的特點及免疫抑制劑麥考酚酸嗎乙酯、來氟米特和他克莫司對其表達的影響。 方法：本試驗主要分三個階段：第一階段，制備腎毒性血清。體重180～200g的雄性SD大鼠，處死后摘取腎臟，經(jīng)腎動脈灌注無菌冰生理鹽水充分沖洗，分離腎皮質(zhì)制備腎皮質(zhì)組織勻漿，與等量完全弗氏佐劑充分混合后給予4只新西蘭白

2、兔皮下多部位多次注射，誘導兔生成大鼠腎毒血清；第二階段探索誘導大鼠腎毒血清性腎炎的腎毒血清最適用量；第三階段觀察免疫抑制劑麥考酚酸嗎乙酯、來氟米特和他克莫司對大鼠腎毒血清性腎炎干預治療作用及對其腎組織中TNF-α與NF-κB表達的影響，SD大鼠50只，隨機抽取10只為正常對照組，其余40只全部給予兔IgG皮下注射進行預免疫，5天后其余40只采用靜脈注射兔抗鼠腎小球基底膜(GBM)抗血清(NTS)制備腎毒血清性腎炎大鼠模型，并隨機分為病理

3、對照組、麥考酚酸嗎乙酯干預組、來氟米特干預組和他克莫司干預組，每組各10只，正常對照組同時給予生理鹽水。造模同時各治療組均給予相應藥物灌胃給藥每天一次，2周后觀察血清總蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平并處死大鼠，留取腎組織進行病理形態(tài)學分析，并應用免疫組織化學觀察腎組織中TNF-α與NF-κB的表達。 結(jié)果：(1)間接免疫熒光檢測結(jié)果示4只新西蘭白兔中有2只產(chǎn)生高滴度兔(1∶128～1∶25

4、6)抗大鼠腎小球基底膜抗體；(2)預試驗結(jié)果提示給予大鼠4ml/kg腎毒血清可誘導大鼠形成具有相應臨床表現(xiàn)和腎臟病理改變的經(jīng)典腎毒血清性腎炎動物模型；(3)各組較病理對照組細胞數(shù)及新月體百分比減少(P<0.01)，各治療組較正常對照組細胞數(shù)增多(P<0.01)，正常對照組無新月體形成，來氟米特治療組較他克莫司治療組細胞數(shù)及新月體百分比減少(P<0.05)，且較麥考酚酸嗎乙酯治療組減少更明顯(P<0.01)，他克莫司治療組較麥考酚酸嗎乙酯

5、治療組新月體百分比減少(P<0.05)；(4)TNF-α腎小球的表達中，各組均較病理對照組降低(P<0.01)；各治療組均較正常對照組升高(P<0.01)；各治療組間比較，來氟米特治療組較其余兩組降低(P<0.01)，他克莫司治療組雖較麥考酚酸嗎乙酯治療組降低，但差別無顯著性；腎小管的表達中，各組均較病理對照組降低(P<0.01)，各治療組間比較，來氟米特治療組雖較其它兩組降低，但差別無顯著性，各治療組均較正常對照組升高(P<0.01)

6、；(5)NF-κB在病理對照組腎小球和腎小管中的表達均較正常對照組增高(P<0.01)，與病理對照組比較，麥考酚酸嗎乙酯、來氟米特和他克莫司治療后可使其表達減少(P<0.01)，且來氟米特治療組較其它兩藥組下降明顯(P<0．01)，麥考酚酸嗎乙酯治療組較他克莫司治療組在腎小管中表達升高(P<0.05)且在腎小球中表達亦升高(P<0.01)。各治療組與病理對照組比較Tp、Alb增加(P<0.01)，Scr、BUN降低(P<0.01)。