2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的 硅油目前廣泛用于治療復(fù)雜孔源性視網(wǎng)膜脫離,特別是增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)。但眼內(nèi)長期放置硅油可引起許多并發(fā)癥,其中大多與硅油乳化有關(guān)。有報道發(fā)現(xiàn)硅油乳化患者中有視網(wǎng)膜下膜的形成,視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE) 細胞也有增殖;乳化硅油可能刺激膜形成和PVR反應(yīng),但詳細的研究報告不多。本實驗的目的是: (1)利用膜乳化技術(shù)制備乳化硅油,為細胞學(xué)實驗提供適宜的乳化

2、硅油小滴; (2)觀察乳化硅油小滴及血清對人RPE細胞增生及移行活性的影響,以及RPE細胞對硅油小滴的吞噬情況。 方法: 1. 使用微孔膜,孔徑分別為0.2μm和0.45μm,在一定的壓強下使硅油通過微孔膜,分散于磷酸緩沖液(PBS)中,光學(xué)顯微鏡觀察硅油小滴大小,測定硅油小滴平均粒徑。 2. 吞噬實驗:將制備的硅油小滴用酞箐藍標記。加入人RPE細胞培養(yǎng)液中,伴或不伴有血清,孵育24 h。在顯微鏡下計數(shù)被

3、細胞內(nèi)吞的硅油小滴。 3. 嗜銀蛋白分析實驗:培養(yǎng)的人RPE細胞與硅油小滴,伴或不伴有血清,共同孵育24h,進行嗜銀蛋白分析,計數(shù)銀染顆粒數(shù)量,觀察硅油小滴及血清對RPE細胞增殖活性的影響。 4. 移行實驗:應(yīng)用人RPE細胞爬片劃痕損傷模型,加入硅油小滴,伴或不伴有血清,共同孵育72h,計數(shù)進入缺損區(qū)的細胞。 結(jié)果: 1. 在3 個大氣壓作用下,0.2μm 和0.45μm 微孔膜制得的硅油小滴粒徑分別為2

4、.33±0.618μm 和4.63±0.833μm。 2. 在1 個大氣壓下,用孔徑為0.45μm 的微孔膜制得的硅油小滴粒徑為4.25±0.77μm,酞箐藍可示蹤硅油小滴。RPE 細胞吞噬硅油小滴的數(shù)量有明顯劑量依賴性,隨乳化小滴濃度增高,吞噬數(shù)量也增加。乳化硅油小滴濃度為50.0mL/L 時,細胞內(nèi)吞平均數(shù)量為35.93±3.28 個;而加有100mL/L 新生牛血清組,則為40.27±4.34 個(P<0.05)。

5、 3. 硅油小滴對人RPE 細胞增殖活性有刺激作用。加入硅油小滴的人RPE細胞核內(nèi)核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色(AgNORs)顆粒的平均數(shù)量與對照組有顯著差異(P<0.01),但各硅油濃度間差異不顯著(P>0.1)。硅油濃度為12.5mL/L時,細胞核內(nèi)AgNORs 顆粒的平均數(shù)量為2.8±0.63 個,(對照,1.6±0.60 個;P<0.01);在加有100mL/L 新生牛血清組則為4.3±0.92 個,(對照,2.3±0.65個;P<0

6、.01)。 4. 較高濃度硅油小滴可抑制人RPE 細胞的移行,且呈濃度依賴性。硅油小滴濃度為50.0mL/L 時,細胞平均移行數(shù)量為10.6±3.03 個,(對照,69.9±9.88 個;P<0.001);加有100mL/L 新生牛血清時,則為13.2±3.79 個,(對照,91.0±12.99 個;P<0.001)。 結(jié)論: 1. 用微孔膜制得硅油小滴顆粒大小易控制,粒徑均勻。本實驗證明用0.45μm 孔徑的微

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