HGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)髓核細(xì)胞生物學(xué)活性及細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景：退變性椎間盤病是導(dǎo)致各種脊柱退行性疾患的主要原因。椎間盤退行性變是椎間盤突出的前提和病理基礎(chǔ)。椎間盤退變時(shí)其細(xì)胞減少且功能退化，髓核脫水，合成蛋白多糖能力減弱，膠原的排列和類型均發(fā)生改變，正常功能受到嚴(yán)重?fù)p害。椎間盤組織再生能力有限，一旦發(fā)生退變，很難阻止或逆轉(zhuǎn)。研究顯示椎間盤細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)降低和椎間盤退變關(guān)系密切，因此諸多影響椎間盤血供的因素亦可導(dǎo)致椎間盤退變。
　　椎間盤組織內(nèi)髓核細(xì)胞的主要功能是分泌膠原和蛋白聚糖(Pro

2、teoglycan，PG)，其功能降低、細(xì)胞外基質(zhì)減少、微環(huán)境異?？蓪?dǎo)致椎間盤生物學(xué)功能減弱，研究證實(shí)椎間盤退變與來(lái)源于椎間盤細(xì)胞的基質(zhì)合成物減少有關(guān)。
　　目的：觀察攜帶有GFP-HGFcDNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人髓核細(xì)胞后對(duì)髓核細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：收集人退變髓核組織標(biāo)本，分離培養(yǎng)髓核細(xì)胞，構(gòu)建HGF基因質(zhì)粒，采用RocheFuGENE?HD轉(zhuǎn)染試劑，按照6:2、7:2、8:2比例，利用激光共聚焦顯微

3、鏡觀察并篩選HGF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染最佳比例；選取HGF質(zhì)粒最佳作用濃度，設(shè)立對(duì)照組、空白質(zhì)粒組、HGF因子組、HGF基因轉(zhuǎn)染組，作用于髓核細(xì)胞后，采用RT-PCR方法檢測(cè)Ⅱ型膠原、蛋白多糖及SOX9mRNA的表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)髓核細(xì)胞增殖周期。
　　結(jié)果：HGF基因轉(zhuǎn)染髓核細(xì)胞后，激光共聚焦顯微鏡觀察，在7:2時(shí)達(dá)到最佳轉(zhuǎn)染效果，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效率為對(duì)31.4％。HGF因子刺激組和HGF基因轉(zhuǎn)染組均可促使髓核細(xì)胞增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)的表達(dá)，較對(duì)