人骨髓間充質(zhì)干細胞與髓核細胞共培養(yǎng)后的類髓核分化效應及其對髓核細胞表型的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景：
　　 在我國，大多數(shù)的人在其一生中都有過腰背痛的經(jīng)歷，腰背痛及其伴隨的脊柱退行性改變成為骨科的常見病，其高額的醫(yī)療花費以及對患者身心所造成的損害，對個人和社會均造成了巨大負擔。目前，椎間盤的退行性改變被認為是引起腰背痛的首要原因，當前臨床上主要通過保守治療以及手術治療的方法進行干預治療，但無論何種方法，都只能對于已出現(xiàn)的癥狀進行對癥治療，并不能夠從根本上延緩甚至逆轉椎間盤退變。目前，針對椎間盤退變的生物學修復的細胞移植治

2、療為治療這一疾病提供了一種新的思路。其中，通過移植BMSCs來延緩、修復椎間盤退變成為研究熱點。有學者已經(jīng)在動物實驗中證明，體外共培養(yǎng)時，BMSCs和NPCs的相互作用能促使BMSCs向類髓核表型分化同時促進NPCs分化增殖和特征性物質(zhì)表達。這為BMSCs移植治療椎間盤退變提供了理論依據(jù)。本實驗將人BMSCs分別與人正常及退變NPCs進行共培養(yǎng)，研究其類髓核分化效應及其對NPCs表型的調(diào)節(jié)作用。
　　 目的：
　　 探討

3、入骨髓問充質(zhì)干細胞分別與正常及退變髓核細胞共培養(yǎng)后的類髓核分化效應及其對髓核細胞表型的調(diào)節(jié)作用，并進行比較。
　　 方法：
　　 分別取來源于腰椎退變病人以及脊柱側彎病人的間盤組織，通過改良Pfirrmann法對其退變程度進行分級，進行髓核細胞(nucleus pulposus cells，NPCs)的分離培養(yǎng)及鑒定，通過術中椎弓根釘?shù)廊⊙?，對骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow-drived mesenchymal

4、 stem cells，BMSCs)分離培養(yǎng)并進行鑒定。取傳至第三代細胞進行共培養(yǎng)。建立5個培養(yǎng)組：BMSCs單獨培養(yǎng)組，退變NPCs單獨培養(yǎng)組，正常NPCs單獨培養(yǎng)組，BMSCs與退變NPCs共培養(yǎng)組，BMSCs與正常NPCs共培養(yǎng)組。選用去掉掛臂的transwell小室來進行細胞共培養(yǎng)，其小室的底部為聚碳酸酯透水膜（孔隙0.4μm），這使BMSCs分泌的一些因子能夠通過半透膜起作用，同時半透膜的存在，又能將兩種細胞分隔開來，利于細胞

5、的觀察以及之后細胞的分離和結果的檢測。共培養(yǎng)7天后，RT-PCR法檢測各組細胞SOX-9、聚集蛋白聚糖Aggrecan與Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達。
　　 結果：
　　 相較于BMSCs單獨培養(yǎng)組，共培養(yǎng)組BMSCs的SOX-9、Aggrecan與Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達均有明顯增加(p＜0.05)。同時與BMSCs與正常NPCs共培養(yǎng)組相比，BMSCs與退變NPCs共培養(yǎng)組BMSCs的SOX-9、Aggrecan與Ⅱ

6、型膠原蛋白的mRNA表達均有明顯增加(p＜0.05)。與退變NPCs單獨培養(yǎng)組相比，共培養(yǎng)組退變NPCs的SOX-9、Aggrecan與Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達均明顯增加(p＜0.01)。與正常NPCs單獨培養(yǎng)組相比，共培養(yǎng)組正常NPCs的SOX-9、Aggrecan與Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達均明顯增加(p＜0.01)。
　　 結論：
　　 1.BMSCs與NPCs共培養(yǎng)時的相互作用能促使BMSCs向類髓核表型分化，