CyclinD1、nm23-H1基因在周圍型非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)及其與CT征象及預(yù)后的關(guān)系及CT灌注成像在肺內(nèi)良惡性腫塊鑒別診斷中的作用.pdf

1、前言：隨著影像學(xué)技術(shù)的進(jìn)展，影像醫(yī)學(xué)在肺癌臨床診斷、選擇治療方案、判斷療效的評估預(yù)后等方面，起著日益重要的作用。所有影像學(xué)表現(xiàn)特征都有其組織病理學(xué)基礎(chǔ)?，F(xiàn)代分子生物學(xué)研究，對疾病，特別是肺癌的認(rèn)識，已經(jīng)深入到蛋白質(zhì)和基因水平，并已形成分子病理學(xué)、腫瘤免疫學(xué)等新興邊緣學(xué)科。對癌基因、抑癌基因及許多與細(xì)胞增殖、分化和腫瘤血管形成有關(guān)的細(xì)胞因子的深入研究，使在蛋白質(zhì)水平和基因水平解釋肺癌的組織病理學(xué)特征成為可能，并有助于解釋肺癌影像表現(xiàn)的多樣

2、性和復(fù)雜性。 近年來，隨著分子生物學(xué)的蓬勃發(fā)展，在肺癌早期診斷領(lǐng)域，基因與影像對比研究已成為學(xué)者關(guān)注的焦點，兩者的有機(jī)結(jié)合可使我們了解決定肺癌惡性程度和預(yù)后的生物學(xué)因素與腫瘤生長方式和形態(tài)學(xué)表現(xiàn)的相關(guān)性成為可能。 關(guān)于CyclinD1、nm23-H1基因與影像學(xué)表現(xiàn)的相關(guān)性研究，目前為止國外未見相關(guān)報道。CyclinD1與肺癌CT征象相關(guān)性研究國內(nèi)僅見一篇報道，nm23-H1與肺癌CT及MR征象相關(guān)性研究國內(nèi)各見一篇報道

3、。上述報道都是用免疫組化方法檢測蛋白表達(dá)并研究其與肺癌CT或MR征象的相關(guān)性。本研究在此基礎(chǔ)上利用蛋白免疫印記技術(shù)(Western-blot)及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法，對蛋白及mRNA進(jìn)行半定量，并且相互印證，從而使基因、蛋白檢測更加準(zhǔn)確，說服力更強(qiáng)，可信度更高。為肺癌的診斷提供了一個較客觀的參考依據(jù)，能夠較正確評價非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后，使患者獲得合理的科學(xué)方法，有利于提高肺癌患者的生存率。 CT以其優(yōu)異的時間和密度分辨率

4、在肺內(nèi)病變的診斷和鑒別診斷中一直發(fā)揮重要的作用。以往肺內(nèi)腫塊的CT診斷主要依靠形態(tài)學(xué)特點和單純的增強(qiáng)值變化。近年來，隨著科學(xué)研究的深入發(fā)展，肺內(nèi)腫塊的研究重點已從宏觀轉(zhuǎn)向微觀—即由形態(tài)學(xué)的差異向功能改變進(jìn)行研究。CT灌注成像(CTperfusionimaging)能從功能上反映腫塊的微觀狀態(tài)，可為肺內(nèi)腫塊的診斷、鑒別診斷及治療方案的確定提供更多信息，正在成為研究熱點。 關(guān)于肺CT灌注成像國外已有一些報道，但利用CT灌注成像進(jìn)行肺

5、內(nèi)腫塊鑒別國內(nèi)外報道較少，國內(nèi)僅見兩篇報道，該兩篇報道提出炎性腫塊的時間—密度曲線峰值低于周圍型肺癌，而且沒有提出具有特異診斷價值的灌注參數(shù)。本實驗在此基礎(chǔ)上利用繪制平均時間—密度曲線及特定的灌注參數(shù)進(jìn)行鑒別，提出了自己的觀點，但同時發(fā)現(xiàn)CT灌注技術(shù)仍然存在一些不足，仍然需要不斷完善，進(jìn)一步探索。 目的：一.探討CyclinD1蛋白在周圍型非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)及其與CT征象及預(yù)后的關(guān)系。 二.通過免疫組化、Western-

6、blot、PCR方法，檢測nm23-H1基因在周圍型非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)是否一致，并且相互印證，從而增加了nm23-H1基因表達(dá)與周圍型非小細(xì)胞肺癌的臨床生物學(xué)行為及其與CT征象相關(guān)性研究的可信度，為肺癌的診斷提供了一個較客觀的參考依據(jù)，能夠較正確評價周圍型非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后，使患者獲得合理的科學(xué)方法，有利于提高肺癌患者的生存率。 三.探討多排CT灌注成像技術(shù)在良惡性腫塊診斷及鑒別診斷中的作用 材料與方法：一.92例

7、病理證實的非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)前行CT檢查，應(yīng)用免疫組化SP法檢測CyclinD1基因在周圍型非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，回顧性探討CyclinD1基因與非小細(xì)胞肺癌的CT征象、生物學(xué)行為及其預(yù)后的關(guān)系。 二.31例非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)前行多排CT檢查，通過免疫組化、Western-blot、PCR方法，以三個不同方式及水平檢測nm23-H1基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，探討CyclinD1基因與非小細(xì)胞肺癌的CT征象、生物學(xué)行為的關(guān)系。

8、 三.18例肺內(nèi)腫塊患者行肺CT灌注成像，探討CT灌注成像技術(shù)在周圍型肺癌、炎性腫塊、結(jié)核球的診斷及鑒別診斷中的作用。 結(jié)果：一.在組織類型、腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期、年齡、性別組中，CyclinD1蛋白表達(dá)陽性率無顯著性差異，p＞0.05；在深分葉征、棘突征、短細(xì)毛刺征、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，CyclinD1蛋白表達(dá)水平明顯高于無上述征象者，且有顯著性差異，p＜0.05；在腫瘤大小、空洞、胸膜凹陷組中，CyclinD1

9、蛋白表達(dá)陽性率無顯著性差異，p＞0.05。 二.在92例非小細(xì)胞肺癌中，因失訪或死于其它疾病19例，以壽命表法計算CyclinD1蛋白表達(dá)陽性及陰性患者的累計生存率及中位生存期，CyclinD1蛋白表達(dá)陰性組中位生存期為35.88個月，陽性組中位生存期為23.69個月。陰性組累計生存率及中位生存期較陽性組高，兩組累計生存率整體比較經(jīng)Log-rank檢驗，統(tǒng)計量為4.76，p值為0.0291＜0.05，兩組生存時間有顯著性差異，提

10、示CyclinD1為一負(fù)性預(yù)后因子。 三.Cox回歸模型結(jié)果：CyclinD1蛋白表達(dá)、棘突征、短細(xì)毛刺征、深分葉征及縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計學(xué)意義，p＜0.05；CyclinD1蛋白表達(dá)、棘突征、短細(xì)毛刺征、深分葉征及縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的系數(shù)值均為正值，為獨立危險預(yù)后因素。棘突征、短細(xì)毛刺征、深分葉征及縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移OR值較大，與肺癌預(yù)后的關(guān)系較大。 四.免疫組化顯示：在高中低分化程度之間，腫瘤TNM分期之間，nm23-H1蛋

11、白表達(dá)陽性率有顯著性差異，p＜0.05；在年齡、性別、組織類型組中，nm23-H1蛋白表達(dá)陽性率無顯著性差異，p＞0.05；在深分葉征、棘突征、短細(xì)毛刺征、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，nm23-H1蛋白表達(dá)陽性率有顯著性差異，p＜0.05；在腫瘤大小、空洞、胸膜凹陷組中，nm23-H1蛋白表達(dá)陽性率無顯著性差異，p＞0.05。 五.Western-blot顯示：在高中低分化程度之間，nm23-H1蛋白表達(dá)陽性率有顯著性差異，p＜0.05

12、；在年齡、性別、腫瘤TNM分期、組織類型組中，nm23-H1蛋白表達(dá)無顯著性差異，p＞0.05。 六.PCR顯示：在高中低分化程度之間，nm23-H1mRNA表達(dá)有顯著性差異，p＜0.05；在年齡、性別、腫瘤TNM分期、組織類型組中，nm23-H1mRNA表達(dá)無顯著性差異，p＞0.05。 七.Western-blot和PCR顯示：在深分葉征、棘突征、短細(xì)毛刺征、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，nm23-H1蛋白及mRNA有顯著性差異

13、，p＜0.05；在腫瘤大小、空洞、胸膜凹陷組中，nm23-H1基因表達(dá)無顯著性差異，p＞0.05。 八.免疫組化、Western-blot、PCR三種檢查方法顯示nm23-H1基因表達(dá)與周圍型非小細(xì)胞肺癌的臨床生物學(xué)特性的關(guān)系基本一致，但免疫組化顯示nm23-H1基因表達(dá)與腫瘤TNM分期有關(guān)，Western-blot、PCR顯示nm23-H1基因表達(dá)與腫瘤TNM分期無關(guān)。三種檢查方法顯示nm23-H1基因表達(dá)與周圍型非小細(xì)胞肺癌

14、的CT征象的關(guān)系完全一致。 九.周圍型肺癌、炎性腫塊表現(xiàn)為隨造影劑快速注入，曲線有明顯的上升支，炎性腫塊峰值最高，周圍型肺癌次之，結(jié)核球峰值較前兩者低，炎性腫塊及周圍型肺癌達(dá)峰值后都有一個平臺期，二者曲線形態(tài)相似，但炎性腫塊的時間—密度曲線達(dá)到峰值后下降較周圍型肺癌早。二者與結(jié)核球的時間—密度曲線明顯不同，結(jié)核球注人造影劑后曲線走行平坦，腫塊CT值無明顯增加。 十.在PS組中，周圍型肺癌較炎性腫塊及結(jié)核球高，組間兩兩比較

15、均有顯著性差異，p值均小于0.05；在BV、BF、MTT組中，周圍型肺癌、炎性腫塊及結(jié)核球組間兩兩比較均無顯著性差異，p值均大于0.05；炎性腫塊、結(jié)核球組間兩兩比較，PS、BV、BF、MTF均無顯著性差異，p＞0.05。 十一.BF與BV、PS之間呈高度正相關(guān)，p＜0.01，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.615、r=0.651；BF與MTT之間無相關(guān)關(guān)系，p＞0.05；BV、MTT、PS之間無相關(guān)關(guān)系，p＞0.05。 十二.C

16、T灌注參數(shù)圖像經(jīng)偽彩處理后，顯示其病變范圍比常規(guī)CT所見較大，對腫瘤內(nèi)的實質(zhì)部分顯示較真實、可靠。 結(jié)論：一.CyclinD1蛋白表達(dá)在肺癌的發(fā)生、發(fā)展及CT征象中可能起重要作用，檢測該基因蛋白并結(jié)合CT征象可作為臨床診斷及預(yù)后評估的指標(biāo)。 二.nm23-H1蛋白及mRNA表達(dá)在肺癌的發(fā)生、發(fā)展及CT征象中可能起重要作用，檢測該基因并結(jié)合CT征象可作為臨床診斷及預(yù)后評估的指標(biāo)。 三.通過免疫組化、Western-

17、blot及PCR方法，以三個不同方式及水平檢測nm23-H1蛋白及mRNA在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)是否一致，并且相互印證，從而增加了nm23-H1基因、蛋白表達(dá)與周圍型非小細(xì)胞肺癌的臨床生物學(xué)行為及其與CT征象相關(guān)性研究的可信度，為肺癌的診斷提供了一個較客觀的參考依據(jù)。 四.CT灌注成像可提供肺內(nèi)腫塊血流灌注的定量信息，可用來鑒別肺內(nèi)不同血供的腫瘤組織，實現(xiàn)了為肺內(nèi)腫塊的診斷提供功能信息的可能。 五.CT灌注成像的灌注參數(shù)

18、中，PS值較為重要，周圍型肺癌與炎性腫塊，可通過PS值，并結(jié)合時間—密度曲線、病史及形態(tài)學(xué)表現(xiàn)，可做出較正確的診斷和鑒別診斷。 六.結(jié)核球可通過時間—密度曲線、PS值與周圍型肺癌、炎性腫塊可做出較正確的診斷和鑒別診斷，時間—密度曲線對肺內(nèi)腫塊可能有鑒別意義，值得進(jìn)一步研究。 七.CT灌注參數(shù)圖像使肺內(nèi)腫塊的血流灌注情況顯示得更加直觀、清晰，并且顯示其病變范圍比常規(guī)CT所見較大，對腫瘤內(nèi)的實質(zhì)部分顯示較真實、可靠。