COX-2通過AA對HSC-T6細胞增殖及Acsl家族基因表達的調(diào)控.pdf

1、目的：
　　本實驗擬從 COX-2代謝底物花生四烯酸這一視角，闡明 COX-2調(diào)控 HSC細胞增殖及ACSL家族基因表達的機制。
　　實驗一
　　方法：
　　1、利用MTT比色法檢測大鼠HSC-T6細胞在花生四烯酸20μM、40μM、60μM24h、48h的增殖情況。
　　2、利用RT-PCR檢測AA20μM、AA40μM、AA60μM組時HSC的COX-2、ACSL家族基因的表達情況。
　　結(jié)果：<

2、br>　　1、花生四烯酸20μM、40μM、60μM時HSC細胞生存率增加（p<0.05），在40μM濃度下作用48h時增加顯著（p<0.05）。
　　2、COX-2基因在AA20μM、AA40μM表達增高(p<0.05)，ACSL1基因在AA60μM表達相對增高(p<0.05)，ACSL3、ACSL6基因在 AA40μM、AA60μM表達增高(p<0.05)，ACSL4、ACSL5基因在各組表達無顯著變化(p>0.05）。

3、>　　實驗二
　　方法：
　　1、向HSC-T6轉(zhuǎn)染構(gòu)建的pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2 shRNA1，熒光顯微鏡下評估其轉(zhuǎn)染效率。分組為①HSC組；②AA40μM組；③pYr-1.1HK+AA組；④COX-2 shRNA1+AA組。AA組濃度為MTT篩選的最佳反應(yīng)濃度40μM。
　　2、利用MTT比色法檢測轉(zhuǎn)染后各組HSC細胞增殖情況。
　　3、利用WB技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染48h后各組COX-2、ACSL

4、家族基因的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、AA40μM組較HSC組OD值增加（p<0.05），COX-2 shRNA1+AA組與pYr-1.1HK+AA組比較OD值降低（p<0.05），COX-2 shRNA1+AA組較HSC組OD值無顯著差異。
　　2、AA組 COX-2、ACSL1、ACSL6基因表達較 HSC組增加(p<0.05）， AA+COX-2shRNA轉(zhuǎn)染組較pYr-1.1HK+AA空質(zhì)粒組COX-2、A