放療抵抗和放療敏感鼻咽癌細(xì)胞系差異miRNA和mRNA表達(dá)譜的整合分析.pdf

1、[目的]：鼻咽癌好發(fā)于中國南方和東南亞。放射治療是目前的主要治療方法，但放療抵抗仍然是影響患者生存時間的關(guān)鍵因素。本研究旨在鑒定鼻咽癌放療抵抗相關(guān)的miRNAs和基因，并探討其可能作用機(jī)制，為指導(dǎo)鼻咽癌的治療、改善鼻咽癌預(yù)后提供理論和實驗依據(jù)。
　　[材料與方法]：以放療敏感鼻咽癌細(xì)胞系CNE2和放療抵抗鼻咽癌細(xì)胞系CNE2-IR為樣本，運(yùn)用miRNA芯片和基因表達(dá)譜（mRNA表達(dá)譜）芯片方法鑒定其差異表達(dá)miRNA和mRNA，采

2、用qRT-PCR技術(shù)驗證芯片結(jié)果的可靠性，采用數(shù)據(jù)庫分析預(yù)測以及miRNA和mRNA的表達(dá)譜的反相關(guān)分析方法鑒定miRNA的相關(guān)靶基因，同時采用生物信息學(xué)方法預(yù)測miRNA靶基因的功能及相關(guān)信號傳導(dǎo)通路，構(gòu)建miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖。最后，我們深入研究miRNA-23a及其靶基因IL-8在鼻咽癌放療抵抗中的作用及其機(jī)制。
　　[結(jié)果]：通過本研究，主要得到以下5方面的的結(jié)果:(1)利用miRNA和mRNA表達(dá)譜芯片技術(shù)，在CN

3、E2-IR和CNE2細(xì)胞中鑒定了15個差異表達(dá)的miRNAs分子和372個差異表達(dá)的mRNAs分子，對隨機(jī)選取的9個差異表達(dá)的miRNAs分子和8個差異表達(dá)的基因進(jìn)行qRT-PCR驗證，驗證結(jié)果與芯片結(jié)果一致;(2)采用數(shù)據(jù)庫分析預(yù)測以及miRNA和mRNA的表達(dá)譜的反相關(guān)分析方法鑒定了174個miRNA的靶基因，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)靶基因的的功能及其調(diào)控的信號傳導(dǎo)通路與腫瘤治療抵抗相關(guān);(3)采用生物信息學(xué)方法構(gòu)建了一個包含375個miRNA-

4、靶基因?qū)Φ霓D(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，在這一調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，6個miRNA共同調(diào)控10個基因;(4)采用雙熒光素酶報道基因系統(tǒng)證實IL-8是miRNA-23a的直接靶基因;(5) qRT-PCR和免疫組化染色分析顯示，在放療抵抗鼻咽癌組織中miRNA-23a表達(dá)下調(diào)，IL-8的表達(dá)水平升高，miRNA-23a與IL-8的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，上調(diào)miRNA-23a的表達(dá)以及抗體中和分泌的IL-8可以降低鼻咽癌細(xì)胞的放療抵抗性。
　　[結(jié)論]：(1)在放療

5、抵抗鼻咽癌細(xì)胞系和放療敏感鼻咽癌細(xì)胞系中篩選到15個差異表達(dá)的miRNAs和372個差異表達(dá)的mRNAs;(2)通過差異miRNA和mRNA表達(dá)譜的整合分析，在放療抵抗鼻咽癌細(xì)胞系中識別了174個差異miRNAs的靶基因;(3)構(gòu)建了一個包含375個miRNA-靶基因?qū)Φ霓D(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，在這一調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，6個miRNAs共同調(diào)控10個基因;(4)首次發(fā)現(xiàn)并實驗證實IL-8是miRNA-23a的靶基因;(5) miRNA-23a表達(dá)下調(diào)以