白血病抑制因子在大鼠急性和慢性青光眼模型視網膜中的表達和意義研究.pdf

1、目的：研究白血病抑制因子(Leukemiainhibitionfactor，LIF)及其相關信號通路分子在急性和慢性高眼壓大鼠視網膜中表達的動態(tài)變化，并初步探討其意義。
　　方法：1.健康SD大鼠以前房灌注正常生理鹽水的方法使眼壓升高至70mmHg，維持1h。右眼作為正常對照?；貜驼Ｑ蹓汉?2h、24h、2d、3d和7d處死動物。
　　2.健康SD大鼠燒灼鞏膜上靜脈建立慢性高眼壓模型，眼壓升高后3d、1w、2w、3w、4w

2、處死動物。分別取上述模型動物的視網膜組織行TUNEL染色檢測視網膜神經節(jié)細胞凋亡，以HE染色檢測視網膜組織結構變化，透射電子顯微鏡下觀察視網膜組織。取視網膜組織提取總蛋白及總RNA，以Westernblot法檢測視網膜中LIF、LIF-receptor(LIFR)及LIF下游信號通路分子signaltransducersandtranscriptionactivators3(STAT3)、磷酸化STAT3(P-STAT3)、serine

3、-threoninekinase(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)、extracellularregulatedproteinkinases(ERK)和磷酸化ERK(P-ERK)蛋白表達水平，以Real-timePCR檢測LIF和LIFRmRNA表達水平。
　　結果：1.與正常對照相比，HE染色結果顯示隨著時間延長，急性高眼壓組視網膜內叢狀層及內核層變薄，視神經節(jié)細胞數(shù)量逐漸減少;TUNEL染色結果顯示急性高眼壓組細胞凋亡數(shù)量

4、顯著增加，急性高眼壓后24h細胞凋亡數(shù)量最多。透射電鏡結果顯示再灌注后12h及3d，視網膜神經節(jié)細胞發(fā)生凋亡晚期表現(xiàn)，染色質濃縮、邊集，線粒體空泡化，發(fā)生明顯腫脹，再灌注后12h凋亡細胞數(shù)量明顯多于再灌注后3d。與正常對照相比，急性高眼壓組LIF蛋白表達上調，急性高眼壓后12h表達水平最高;LIFR蛋白表達水平于各時間點均高于正常對照組，且隨時間延長逐漸升高。LIFmRNA表達水平上調，急性高眼壓后12h表達最高;LIFRmRNA在急性

5、高眼壓后表達上調，3d時表達水平最高。下游信號通路分子蛋白STAT3、Akt及其磷酸化形式P-STAT3、P-Akt表達均高于對照組。急性高眼壓組ERK表達無明顯變化，P-ERK表達下調。
　　2.與正常對照相比，HE染色結果顯示慢性高眼壓后視網膜內叢狀層、外核層明顯變薄，神經節(jié)細胞減少，細胞核大小不一，慢性高眼壓后4w視網膜神經纖維層變薄。TUNEL染色結果顯示慢性高眼壓組細胞凋亡數(shù)量明顯增多。慢性高眼壓后LIF蛋白表達上調，慢

6、性高眼壓后2w表達最高;LIFR蛋白表達水平高于正常對照組，慢性高眼壓后4w表達最高。LIFmRNA表達明顯上調，慢性高眼壓后3d表達最高，LIFRmRNA表達顯著高于正常對照組，并于4w時達最高水平。下游信號分子蛋白STAT3、Akt及其磷酸化形式P-STAT3、P-Akt表達均高于對照組;與正常對照相比，慢性高眼壓組ERK表達水平無明顯變化，P-ERK表達水平2w時無明顯變化，3d、1w、3w和4w時表達下調。
　　結論：LI