資木瓜總皂苷制備工藝優(yōu)化及對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠抗炎免疫作用的影響.pdf

1、目的：資丘皺皮木瓜[Chaenomeles Speciosa(sweet)Nakai]，別名鐵腳梨、資木瓜等，系薔薇科木瓜屬植物貼梗木瓜的果實。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，資木瓜粗提物具有鎮(zhèn)痛、抗炎免疫等作用。為了明確抗炎免疫的活性部位和有效成分，本文以木瓜總皂苷(Total suponins of Chaenomeles Speciosa，TSCS)提取總量為考察指標(biāo)，進(jìn)行提取分離的工藝優(yōu)化；觀察TSCS對佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠的抗炎作用

2、及對大鼠外周T淋巴細(xì)胞亞群、淋巴細(xì)胞增殖，局部組織中PGE2的影響。以期探討和評價TSCS抗風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的生物活性及其藥理學(xué)機(jī)制，為TSCS抗炎免疫和后期的深度開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　 方法：(1)TSCS提取分離工藝的優(yōu)化選用齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度法，以5[％]冰乙酸一香草醛溶液和高氯酸為顯色劑，于550nm處測定吸光度。以齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計算得回歸方程A=0.0029X+0

3、.0255，r=0.9987，方程在30～130 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以此計算TSCS的含量。以乙醇為提取溶劑，采取正交試驗法考察乙醇濃度、溶媒用量、提取時間、提取次數(shù)4個因素，每個因素設(shè)置三個水平，確定最佳提取條件。采用D101大孔樹脂柱，分離純化TSCS。(2)TSCS對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的治療作用將40只雄性wistar大鼠隨機(jī)分為5組：空白組；模型對照組；TSCS高、低劑量組和雷公藤多苷(Tripterygium Glycos

4、ides,TG)陽性對照組。建立完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的AA模型，致炎后14天灌胃給藥，連續(xù)13天，其間觀察TSCS對AA大鼠右后繼發(fā)性足腫脹度，左后原發(fā)性足腫脹度的影響。第28天處死動物，用MTT法測定淋巴細(xì)胞增殖活性；流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中CD4+、CD8+的表達(dá)水平；使用HE染色觀察AA大鼠右后踝關(guān)節(jié)病理形態(tài)學(xué)改變；檢測AA大鼠左后足趾PGE2的含量。
　　 結(jié)果：(1)以70[％]乙醇為提取溶劑，料液比1:10，提取次數(shù)為3次

5、，時間為 1.5 h，TSCS的提取率最高(1.7[％])。(2)與模型組比較，TSCS可明顯減輕AA大鼠右后繼發(fā)性和左后原發(fā)性足腫脹度(P<0.01)；同時，TSCS可降低AA大鼠外周血CD4+表達(dá)水平，但CD8+表達(dá)水平無明顯變化；TSCS還可明顯降低炎性足趾中PGE2的含量。HE染色發(fā)現(xiàn)，TSCS高劑量可有效抑制滑膜細(xì)胞增生，減少炎性細(xì)胞浸潤及新生血管翳的形成。
　　 結(jié)論：(1)最佳提取條件為A2B1C2D3。D101大