腦紅蛋白在脊髓缺血再灌注損傷中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：脊髓缺血再灌注損傷(spinal cord ischemia/reperfusioninjury，SCI)在臨床上十分常見(jiàn)。目前關(guān)于SCI的損傷修復(fù)機(jī)制尚不十分明確，在臨床治療方面主要是針對(duì)其損傷機(jī)制進(jìn)行的，而對(duì)其內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制的相關(guān)研究卻明顯不足。因此，加強(qiáng)SCI內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制研究，以便治療過(guò)程中調(diào)動(dòng)其內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，為SCI治療提供新的思路。研究發(fā)現(xiàn)[1]，腦紅蛋白(neuroglobin，NGB)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用，可以

2、清除細(xì)胞內(nèi)的多余的反應(yīng)性氧化物(reactive oxidativespecies，ROS)，減弱脂質(zhì)過(guò)氧化作用。另外，NGB可減輕細(xì)胞損害引起的線粒體異常和細(xì)胞調(diào)亡，提高細(xì)胞的存活。目前關(guān)于NGB在SCI中的表達(dá)及其意義尚未見(jiàn)確切報(bào)道。為此，本研究在制作SCI模型的基礎(chǔ)上，對(duì)NGB的表達(dá)變化規(guī)律進(jìn)行了探討，以期為脊髓損傷修復(fù)機(jī)制的研究和臨床干預(yù)性治療提供試驗(yàn)依據(jù)。 方法： ①健康成年Wistar大鼠56只，雌雄不拘，體

3、質(zhì)量250～300 g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)將動(dòng)物分為兩組：脊髓壓迫缺血再灌注組50只，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)10只；假手術(shù)組共6只，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)1只。②采用大鼠脊髓壓迫器(專利號(hào)稱ZL200520009289)制備脊髓壓迫缺血再灌注模型；假手術(shù)對(duì)照組，只作全椎板切除不做脊髓壓迫。 ③運(yùn)用原位雜交組織化學(xué)技術(shù)、Western-blotting等方法，分別于缺血再灌注后2、12、24、48和72h，檢測(cè)壓迫段脊髓組織中NGBmR

4、NA和NGB的表達(dá)變化情況。 ④利用北京航空航天大學(xué)生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(CM-2000B)和SAS統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所得圖像和數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)果： ①再灌注2h后，NGBmRNA陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量在壓迫段脊髓開(kāi)始表達(dá)上調(diào)，在24h和48h較為明顯,48h達(dá)峰值， 72h表達(dá)減少，在2、12、24、48和72h不同時(shí)相，其陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)分別為(114±14)、(147±16)、(163±16)、(182±17)和(150

5、±18)，與假手術(shù)組相比較，具有顯著性差異(P＜0.05)。 ②再灌注2h后，NGBmRNA陽(yáng)性神經(jīng)元平均光密度值(OD)在壓迫段脊髓開(kāi)始升高，在24h和48h較為明顯,48h達(dá)峰值， 72h表達(dá)減少，在2、12、24、48和72h不同時(shí)相，其平均光密度值分別為(0.26±0.05)、(0.28±0.04)、(0.30±0.05)、(0.41±0.08)和(0.32±0.06)，與假手術(shù)組相比較，具有顯著性差異(P＜0.05)。

6、 ③Western-blotting的結(jié)果提示NGB表達(dá)和上述結(jié)果一致.在2、12、24、48和72h不同時(shí)相，其積分光密度值分別為(305.13±23.01)、(413.59±34.91)、(791.32±40.72)、(1134.22±41.18)和(516.32±26.45)，與假手術(shù)組相比較，具有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論：在脊髓缺血再灌注損傷中，NGB的表達(dá)變化與再灌注時(shí)間相關(guān)，其表達(dá)的上調(diào)是機(jī)體內(nèi)源性