融安金柑開花關(guān)鍵基因FT-TFL1同源基因克隆及其功能初步研究.pdf

1、Flowering LocusT(FT)/Terminal Flower Like1(TFL1)基因家族是植物開花調(diào)控途徑的重要整合因子和調(diào)控植物開花的關(guān)鍵所在，在花形成過程中起著關(guān)鍵的作用。目前已從蘋果、葡萄、山核桃、柑橘、龍眼、杧果等多種果樹中克隆獲得了FT/TFL1同源基因，并對部分植物FT/TFL1同源基因的功能進(jìn)行了研究。金柑的開花習(xí)性與其它柑橘類果樹不同，其開花的分子機(jī)理研究較為鮮見。為初步探明FT/TFL1基因在金柑開花調(diào)

2、控中的作用，本論文以融安金柑為試材，進(jìn)行其同源基因克隆與生物信息學(xué)分析、表達(dá)特性及轉(zhuǎn)基因等研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1.獲得3個融安金柑FT/TFL1同源基因的CDS序列，命名為FcFT1(531bp)、FcFT2(516bp)、FcTFL1(519bp)。對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析可知:FcFT1編碼177個氨基酸，蛋白質(zhì)原子總數(shù)為2791，分析式為C888H1377N255O266S5;理論蛋白質(zhì)分子量為20.0kDa，等電點(diǎn)

3、為6.74;FcFT2編碼172個氨基酸，蛋白質(zhì)原子總數(shù)為2653，分析式為C845H1328N230O240S10;理論蛋白質(zhì)分子量為18.87kDa，等電點(diǎn)為7.81;FcTFL1編碼173個氨基酸，蛋白質(zhì)原子總數(shù)為2733，分析式為C869H1359N249O250S6;理論蛋白質(zhì)分子量為19.49 kDa，等電點(diǎn)為8.89;3個蛋白均具有磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白(PEBP)結(jié)構(gòu)域。
　　2.氨基酸同源性分析表明3個金柑蛋白序列

4、與其它15個物種的FT同源蛋白相似度高，同源性為77.48％;系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明FcFT1與溫州蜜柑和枳殼的FT同源基因親緣關(guān)系最近;FcFT2與克里曼丁橘、龍眼的FT同源基因匯聚在一起;FcTFL1也與克里曼丁橘、枳殼等親緣度最高。
　　3.利用實(shí)時熒光定量技術(shù)(qRT-PCR)分析FcFT1、FcFT2、FcTFL1在融安金柑不同組織、不同花器官部位的表達(dá)量，以及分析盛花期時，在花、莖、葉中的日周期表達(dá)情況。
　　(1)

5、FcFT1、FcFT2、FcTFL1在結(jié)果樹莖、葉組織中的表達(dá)量均高于幼樹的，F(xiàn)cFT1在成熟葉中的表達(dá)量高于成熟莖和花芽，而FcFT2、FcTFL1在成熟葉中的表達(dá)量略低于成熟莖。
　　(2)3個基因在金柑花器官不同組織中表達(dá)模式存在差異，F(xiàn)cFT1基因平均表達(dá)量:花藥＞花托＞花絲＞花瓣＞子房，F(xiàn)cFT2基因平均表達(dá)量:子房＞花絲＞花藥＞花托＞花瓣，F(xiàn)cTFL1基因平均表達(dá)量:花絲＞花藥＞花托＞花瓣＞子房。
　　(3)在日

6、周期中，F(xiàn)cFT1、FcFT2、FcTFL1白天的表達(dá)量高于夜晚。3個基因在花中的表達(dá)量均于正午達(dá)到峰值。FcFT1、FcFT2基因在莖中的顯著表達(dá)時間基本相同。FcTFL1基因在莖、葉組織中的最高表達(dá)量比FcFT1、FcFT2基因的推遲了兩個小時。
　　(4)3個基因在花、莖、葉中的平均表達(dá)量為FcTFL1＞FcFT2＞FcFT1，平均表達(dá)水平為莖＞花＞葉。FcFT1、FcFT2、FcTFL1基因都能在金柑生長發(fā)育的多個時期多個