擬南芥開花調(diào)控基因FVE和EFS1的克隆與功能初步分析.pdf

1、本研究從擬南芥Columbia生態(tài)型的T-DNA插入突變體庫(kù)中篩選得到1株晚花突變體(編號(hào)為221-1)和1株早花突變體(編號(hào)為426-2)，晚花突變體221-1葉片大而肥厚，蓮座葉片數(shù)量多，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期顯著延長(zhǎng)，開花時(shí)間延遲60 d左右。早花突變體426-2在短日照下葉面積小，蓮座葉片數(shù)量少，抽苔后花莖分支數(shù)多，葉片數(shù)量增多，抽苔時(shí)間和開花時(shí)間都比野生型早10d左右。通過(guò)Southern雜交確定其T-DNA插入拷貝數(shù)均為單拷貝。

2、 試驗(yàn)對(duì)TAIL-PCR的影響因素進(jìn)行了優(yōu)化，并利用優(yōu)化的TAIL-PCR條件擴(kuò)增了晚花突變體221-1 T-DNA插入位點(diǎn)的側(cè)翼序列。將所獲得序列與TAIR(The Arabidopsis Information Resource)中基因序列進(jìn)行同源性比對(duì)，確定了突變體221-1中的突變基因?yàn)锳T2G19520.1基因(晚花相關(guān)基因)，明確了該基因是自主開花途徑中一個(gè)關(guān)鍵基因一FVE基因，且T-DNA的插入位點(diǎn)位于基因的第六個(gè)外顯子上

3、。該突變體與已有的突變體fve-1、fve-2(Ler生態(tài)型)是等位突變體，與fve-3(Col-0生態(tài)型)是同一基因的不同突變體。因此，將該突變體命名為fve-4。突變體fve-1、fve-2、fve-3和fve-4都是FVE基因發(fā)生突變，但在FIrE基因中的突變位置不同(分別是第七個(gè)外顯子，第八個(gè)外顯子，第一個(gè)外顯子和第六個(gè)外顯子)，且推遲開花的時(shí)間不同(fve-1推遲開花時(shí)間為12d，fve-2推遲開花時(shí)間為20d，而fve-4推

4、遲開花時(shí)間長(zhǎng)達(dá)60d左右)。 利用Genomie Walking技術(shù)獲得了早花突變體T-DNA插入位點(diǎn)的側(cè)翼序列。將所獲得序列與TAIR中的已知基因序列進(jìn)行同源性比對(duì)，確定了早花相關(guān)基因?yàn)锳T4G36680.1基因(命名為EFS1)，且T-DNA的插入位點(diǎn)位于AT4G36680.1基因的5'非編碼區(qū)。該基因具有PPR(pentatricopeptide repeats)家族蛋白和異戊烯基轉(zhuǎn)移酶(IPT)的結(jié)構(gòu)域，并在鹽脅迫方面起