腎細(xì)胞癌中Dickkopf-1及Dickkopf-3的表達(dá)水平及臨床意義的研究.pdf

1、目的:腎細(xì)胞癌(Renal cell carcinoma，RCC)又稱腎腺癌，是指起源于腎小管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80％-90％，全球每年大約有20余萬人被診斷為腎癌。在我國泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中，其發(fā)病率僅次于膀胱癌而居第2位。因此，探討腎細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制，特別是分子水平的研究以尋找新的治療靶點(diǎn)及有效的治療藥物，具有十分重要的意義。近年來，Wnt信號(hào)通路與腫瘤關(guān)系的研究已經(jīng)變成熱點(diǎn)問題，研究發(fā)現(xiàn)Wnt信號(hào)通路中因子異常激活

2、，都有可能導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性化。Dickkopf-1(DKK-1)、Dickkopf-3(DKK-3)基因作為Wnt信號(hào)通路中的抑癌基因，其在腎細(xì)胞癌組織中的作用尚未明確。本課題以RCC為研究對象，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)的方法，通過研究DKK-1、DKK-3在腎細(xì)胞癌中mRNA和蛋白表達(dá)情況，試圖揭示這兩種抑癌基因與腎細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中的作用和相互關(guān)系，從而為腎細(xì)胞癌的病因、診斷及治療提供新的理論、實(shí)驗(yàn)依據(jù)和治療

3、新途徑。
　　方法:
　　1采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR)技術(shù)分別檢測經(jīng)過病理證實(shí)的36例腎細(xì)胞癌組織和正常腎組織中抑癌基因DKK-1、DKK-3的mRNA表達(dá)情況。
　　2應(yīng)用免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry, IHC）PV-9000二步法分別檢測經(jīng)過病理證實(shí)的47例腎細(xì)胞癌組織和31例正常腎

4、組織中DKK-1、DKK-3的蛋白表達(dá)情況。
　　3運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1腎細(xì)胞癌組織中DKK-1、DKK-3基因的表達(dá)及其與臨床病理資料之間的關(guān)系
　　1.1腎細(xì)胞癌組織中DKK-1、DKK-3基因mRNA表達(dá)情況
　　DKK-1基因mRNA在腎細(xì)胞癌和正常腎組織中的表達(dá)量分別為0.21±0.06和0.28±0.05，DK

5、K-3基因mRNA在腎細(xì)胞癌和正常腎組織中的表達(dá)量分別為0.65±0.15和0.79±0.13，腎細(xì)胞癌組織中DKK-1、DKK-3基因的mRNA表達(dá)量明顯低于正常腎組織，兩者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　1.2腎細(xì)胞癌組織中DKK-1、DKK-3基因蛋白表達(dá)情況
　　47例腎細(xì)胞癌組織中，其中有28例DKK-1基因蛋白表達(dá)為陽性，陽性表達(dá)率為59.5％;正常腎組織31例，其中28例DKK-1基因蛋白表達(dá)為陽性

6、，陽性表達(dá)率為90.3％，腎細(xì)胞癌組織中DKK-1蛋白陽性表達(dá)率明顯低于正常腎組織(P＜0.05)，隨腎細(xì)胞癌TNM分期的升高，DKK-1陽性表達(dá)率有下降趨勢。腫瘤最大徑≤7.0cm組陽性表達(dá)率結(jié)果79.3％(23/29)顯著高于腫瘤最大徑＞7.0cm組陽性表達(dá)率44.4％(8/18)。在無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率66.8％(22/33)相比有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率10.3％(1/14)顯著增高，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

7、0.05)，而DKK-1在患者性別和年齡的陽性表達(dá)率無明顯區(qū)別，兩者差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　47例腎細(xì)胞癌組織中，其中31例DKK-3基因蛋白表達(dá)陽性，表達(dá)陽性率為65.9％;正常腎細(xì)胞組織31例，其中29例DKK-3基因蛋白表達(dá)陽性，表達(dá)陽性率為93.5％，腎細(xì)胞癌組織中DKK-1蛋白陽性表達(dá)率明顯低于正常腎組織(P＜0.05)，DKK-3的陽性表達(dá)率，在Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。腫

8、瘤最大徑≤7.0cm組陽性表達(dá)率的結(jié)果72.4％(21/29)顯著高于腫瘤最大徑＞7.0cm組陽性表達(dá)率33.3％(6/18)，在無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率60.6％(3/14)相比有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率21.4％(3/14)顯著增高，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而DKK-3在患者性別和年齡的陽性表達(dá)率無明顯區(qū)別，兩者差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2腎細(xì)胞癌中DKK-1表達(dá)與DKK-3表達(dá)之間無

9、相關(guān)性(r=0.148，P=0.322＞0.01)。
　　結(jié)論:
　　1 DKK-1、DKK-3的mRNA和蛋白在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯的低于正常腎組織，提示DKK-1和DKK-3表達(dá)下調(diào)可能使其拮抗Wnt信號(hào)通路的功能減弱，一定程度上參與了腎細(xì)胞癌的發(fā)生，兩者有可能作為判斷腎細(xì)胞癌預(yù)后的指標(biāo)。
　　2 DKK-1、DKK-3表達(dá)與腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤大小有關(guān)，而與患者的年齡、性別無關(guān)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表