甘藍(lán)小孢子發(fā)育觀察與小孢子培養(yǎng)中高出胚率的誘導(dǎo)技術(shù)研究.pdf

1、游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)在作物遺傳育種上具有重要的應(yīng)用價(jià)值，通過該技術(shù)一方面可以快速獲得純合體，縮短育種年限，提高育種效率。另一方面，由小孢子培養(yǎng)獲得的胚狀體和再生植株還可以廣泛的應(yīng)用于構(gòu)建遺傳圖譜、基因定位、轉(zhuǎn)基因育種以及染色體工程等等。 試驗(yàn)以甘藍(lán)的11種基因型為材料，進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)。研究甘藍(lán)基因型及其影響因素對(duì)小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響，以秦甘80、8398等為材料，研究花蕾長度、培養(yǎng)基蔗糖濃度、低溫預(yù)處理、高溫前處理、激素以及秋

2、水仙堿等對(duì)甘藍(lán)小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響。主要結(jié)果如下： 1.不同基因型材料適宜取樣花蕾的大小有一定的差異。多數(shù)品種適宜取蕾長度為4.5～5.49mm；選擇略圓形三裂狀小孢子占絕大多數(shù)的花蕾進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)較適合。 2.基因型是影響甘藍(lán)小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素。不同甘藍(lán)基因型小孢子培養(yǎng)的誘導(dǎo)率差異顯著。11個(gè)供試材料中有5個(gè)基因型能誘導(dǎo)胚狀體，其中秦甘80、83982個(gè)材料胚狀體誘導(dǎo)頻率較高；WG03、綠球66、秦甘60

3、、0268、FW25、FW02等6份材料無法獲得胚狀體。 3.培養(yǎng)基最適的蔗糖濃度為13％，但17％的蔗糖濃度更有助于維持細(xì)胞存活率。 4.低溫預(yù)處理和適當(dāng)?shù)母邷靥幚硎切℃咦优囵B(yǎng)中提高胚狀體誘導(dǎo)頻率的重要因素。低溫預(yù)處理對(duì)小孢子胚產(chǎn)量有顯著影響，不同基因型所需預(yù)處理時(shí)間不同。供試材料經(jīng)低溫預(yù)處理，小孢子胚產(chǎn)量均有明顯提高。在小孢子培養(yǎng)前對(duì)花蕾進(jìn)行0～4℃24h的低溫預(yù)處理，并且培養(yǎng)初期給予小孢子33℃24h的高溫暗培養(yǎng)，