Endomorphin-1降低大鼠動脈血壓作用機制的實驗研究.pdf

1、目的：觀察內嗎啡肽-1(endomorphin-1，EM-1)對去甲腎上腺素(norepinephrine,NE)和血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，ANGⅡ)誘導的大鼠離體胸主動脈條張力的影響以及外周靜脈(intravenous inject，iv)和側腦室(intracerebroventricular,icv)分別注射EM-1及其阻斷劑對大鼠動脈血壓，心功能和血清NO含量以及NOS活性的影響，探討EM-1降低大鼠動脈血壓的機

2、制。 方法： (1)Wistar大鼠用20％氨基甲酸乙酯(5 ml/kg)腹腔注射麻醉，頸椎脫位處死，迅速取出胸主動脈，浸入Krebs Henseleit液中，去除血管周圍的結締組織，剪成2.5-3.0 mm寬、10 m m長的螺旋條，置于持續(xù)通入95％O<,2>和5％CO<,2>混合氣的KrebsHenseleit液的玻璃浴槽中，溫度37.0±0.5℃，預負荷1g。平衡1h后，用ACh(10<'-6>mol/L)檢測內皮細胞活

3、性，然后加入NE(10<'-6>mol/L)和ANGⅡ(10<'-7>mol/L)收縮血管作為預處理，5分鐘后給予EM-1(10<'-8>-10<'-6>mol/L)記錄收縮強度。拮抗組提前5分鐘分別給予μ受體阻斷劑cyprodime(10<'-6> mol/L)和NO合成酶抑制劑 Nω硝基-L精氨酸(Nω-nitrolarginine，L-NNA)(10<'-5>mol/L)，然后記錄給予EM-1(10<'-6>mol/L)后的動脈條

4、收縮強度。其中一組用棉簽去除內皮，以觀察內皮對EM-1作用的影響。Wistar大鼠隨機分為對照組(生理鹽水)，EM-1組，EM-1+拮抗劑組，每組6只，每組只給予一種處理。 (2)Wistar大鼠28只，隨機分為動脈血壓測定組(n=13)和心功能測定組(n=15)，20％氨基甲酸乙酯(5ml/kg)腹腔注射麻醉。動脈血壓測定組行右頸總動脈插管，記錄動脈血壓曲線，分析測量收縮壓(systolic blood pressure，SB

5、P)，舒張壓(diastolic bloodpressure，DBP)，平均動脈壓(mean arterial pressure，MAP)以及心率(heart rate，HR)等指標。心功能測定組行左心室插管，記錄室內壓曲線，分析測量左心室收縮壓(leftventeicular systolic pressuer，LVSP)，室內壓峰值(Peak)，室內壓最大上升速率(+dP/dt<,max>)，室內壓最大下降速率(-dP/dt<,ma

6、x>)和心率(HR)等心功能指標。同時測定血清NO含量和NOS活性的變化。左頸外靜脈插管作靜脈注射給藥。觀察不同劑量EM-1(10.20.50μg/kg)對大鼠動脈血壓，心功能以及血清NO含量和NOS活性的影響。以及觀察μ受體阻斷劑cyprodime(1mg/kg)，NO合成酶抑制劑L-NNA(25mg/kg)等藥物對EM-1作用的影響。部分大鼠作雙側迷走神經切斷術以觀察迷走神經對EM-1作用的影響。 (3)Wistar大鼠32

7、只，預先左側腦室埋植套管，術后3天進行實驗。大鼠隨機分為動脈血壓測定組(n=14)和心功能測定組(n=18)，20％氨基甲酸乙酯(5 ml/kg)腹腔注射麻醉。動脈血壓測定組行右頸總動脈插管，記錄動脈血壓曲線，分析記錄以及SBP，DBP，MAP和HR等指標。心功能測定組行左心室插管，記錄室內壓曲線，分析記錄LVSP，Peak，±dP/dt和HR等心功能指標。同時測定血清NO含量和NOS活性的變化。側腦室注射給藥，觀察不同劑量E

8、M-1(10，20，50μg/kg)對麻醉大鼠動脈血壓，心功能以及血清NO含量和NOS活性的影響。以及觀察側腦室注射μ受體阻斷劑cyprodime(125μg/kg)，M受體阻斷劑阿托品(atropine，Atr)(25μg/kg)，靜脈注射NO合成酶抑制劑L-NNA(25 mg/kg)等藥物對EM-1作用的影響。部分大鼠作雙側迷走神經切斷術以觀察迷走神經對EM-1作用的影響。 結果：(1)在無內皮細胞活性的Wistar大鼠離體

9、胸主動脈條中，EM-1不改變NE和ANGII預收縮的血管張力(P>0.05)；在完整內皮細胞活性的大鼠離體胸主動脈條中EM-1劑量依賴性減弱NE和ANGII預收縮的血管張力(P<0.01)，cyprodime和L-NNA可阻斷其效應(P<0.01)。 (2)在動脈血壓測定組iv EM-1劑量依賴性減弱麻醉大鼠SBP、DBP、MAP和HR(P<0.05，P<0.01)，血清NO含量和NOS活性升高(P<0.01和P<0.01)；在

10、心功能測定組iv EM-1劑量依賴性減弱麻醉大鼠LVSP，Peak，±dP/dt<,max>和HR等心功能指標(P<0.05，P<0.01)：iv cyprodime和iv L-NNA可以阻斷iv EM-1對動脈血壓，血清NO含量和NOS活性的影響。切斷雙側迷走神經可減弱iv EM-1引起的動脈血壓降低和心功能減弱效應(P<0.01)，但iv L-NNA不能消除EM-1對心功能減弱的影響(P>0.05)。 (3)在動脈血壓測定組

11、icv EM-1劑量依賴性減弱麻醉大鼠SBP、DBP、MAP和HR(P<0.05，P<0.01)，血清NO含量和NOS活性均無明顯變化(P>0.05)；在心功能測定組icv EM-1劑量依賴性減弱麻醉大鼠LVSP，Peak，±dP/dt<,max>和HR等心功能指標(P<0.05，P<0.01)。icv cyprodime可阻斷，icv M受體阻斷劑阿托品以及切斷雙側迷走神經可大部分消除icv EM-1引起的動脈血壓減弱和心功能減弱效應

12、(P<0.01)，但iv L-NNA對icv EM-1引起的動脈血壓減弱和心功能減弱效應均無影響(P>0.05)。 結論：EM-1能夠降低麻醉大鼠動脈血壓，其作用機理既有外周機制，亦有中樞機制。在外周可能主要通過作用血管內皮μ阿片受體，激活NOS的活性，引起血管內皮NO的釋放導致血管平滑肌舒張，外周阻力降低而降低動脈血壓。在中樞，EM-1可能通過中樞μ阿片受體引起迷走神經興奮，減弱心室收縮功能而降低動脈血壓。此外，尚有中樞M受體