牛初乳中免疫球蛋白的提取及其保護(hù)劑研究.pdf

1、免疫球蛋白是牛初乳中最引人注目的免疫因子，主要應(yīng)用于提高人體的免疫力，增強(qiáng)對(duì)各種疾病的抵抗力。本試驗(yàn)對(duì)免疫球蛋白的分離提純、冷凍干燥、免疫球蛋白在不同條件下的穩(wěn)定性及加入保護(hù)劑對(duì)其穩(wěn)定性改善效果進(jìn)行了研究。 以牛初乳(48h內(nèi))為原料，IgG為目標(biāo)蛋白，對(duì)建立一套提純免疫球蛋白的工藝進(jìn)行研究。牛初乳在3500r/min下離心20rain后脫脂，62℃殺菌30min，調(diào)脫脂初乳pH為4.6在4000r/min下離心15min去酪蛋

2、白，乳清液經(jīng)陰離子交換樹脂過柱純化。洗脫液通過核酸蛋白測(cè)定儀在280nm下測(cè)吸光度值，收集洗脫峰時(shí)的洗脫液經(jīng)SDS-PAGE電泳法鑒定各洗脫峰的蛋白質(zhì)組成，收集第三個(gè)洗脫峰的洗脫液冷凍干燥，經(jīng)正交試驗(yàn)篩選真空冷凍干燥參數(shù)為:預(yù)凍溫度-20℃，預(yù)凍時(shí)間2h，裝料厚度8cm，保護(hù)劑為4％甘氨酸+4％蔗糖，凍干后得到免疫球蛋白IgG的免疫活性為94％。收集的峰液冷凍干燥后得其IgG的提取率為14.6mg/ml，純度達(dá)70.3％。 溶液

3、酸度與受熱程度對(duì)免疫球蛋白活性影響都很大，本試驗(yàn)研究了IgG在pH值為0.5，1.O，2.0，3.0，4.0，5.0時(shí)的穩(wěn)定性以及在60℃，62℃，65℃，70℃，75℃，85℃的穩(wěn)定性，結(jié)果表明:隨pH值的降低免疫球蛋白的穩(wěn)定性急劇下降，免疫球蛋白尤其對(duì)過酸極不穩(wěn)定。免疫球蛋白對(duì)熱敏感，在低溫時(shí)較穩(wěn)定，85℃時(shí)水浴五分鐘免疫球蛋白就會(huì)完全失活。通過人工消化試驗(yàn)得出影響免疫球蛋白在人工胃液、人工腸液中穩(wěn)定性的因素大小為:pH值對(duì)免疫球蛋

4、白活性的影響最大，消化時(shí)間影響次之，蛋白酶與IgG濃度影響最小。 溶液中加入保護(hù)劑對(duì)免疫球蛋白的活性有明顯的保護(hù)作用，本試驗(yàn)研究了在三種保護(hù)劑濃度分別為5％，l0％，15％，pH值為2.0，3.0，4.0時(shí)免疫球蛋白活性保留率。結(jié)果表明:隨著保護(hù)劑濃度的升高，保護(hù)效果越明顯，IgG保存率就越高，三種保護(hù)劑的保護(hù)效果，甘氨酸)蔗糖)山梨醇。 由三因子二次通用旋轉(zhuǎn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)得出，三種保護(hù)劑復(fù)配使用時(shí)，同樣濃度的保護(hù)劑添加量對(duì)免