不同治法方藥對(duì)脂肪肝肝細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機(jī)制影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討疏肝、健脾、活血、祛濕、綜合等中醫(yī)不同治法方藥對(duì)脂肪肝大鼠肝細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，比較不同治法方藥防治脂肪肝作用的差異并揭示其作用機(jī)制。 方法：利用高脂飼料喂養(yǎng)、白酒灌胃復(fù)制大鼠脂肪肝動(dòng)物模型，同時(shí)給予疏肝、健脾、活血、祛濕、綜合不同方藥進(jìn)行干預(yù)。12周后處死大鼠，檢測(cè)血清中TC、TG、ALT、AST等含量；取肝組織，觀察其病理形態(tài)學(xué)的變化；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)NF-кB<'65><,P>在各組肝組織中的表達(dá)；分

2、離肝Kupffer細(xì)胞，采用Western blot方法檢測(cè)大鼠Kupffer細(xì)胞MAPKs通路中ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表達(dá)及磷酸化水平；用RT—PCR方法檢測(cè)Kupffer細(xì)胞中CD14mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.模型組大鼠血清TC、TG、ALT和AST均較正常對(duì)照組升高(P<0.05)。各用藥組TC、TG、ALT、ASI、含量與模型組比較均有下降，以疏肝組、健脾組下降最為顯著(P<0.05)。

3、 2．光鏡觀察：模型組大鼠肝組織呈中度至重度肝細(xì)胞脂肪變性，肝細(xì)胞增大，胞漿內(nèi)脂滴大小不一，細(xì)胞水腫嚴(yán)重，匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤明顯，有較多灶性纖維增生，與正常組比較有顯著性差異(P<0.05)，提示脂肪肝模型復(fù)制成功。健脾組、疏肝組肝細(xì)胞脂肪變性與模型組比較均有顯著性差異(P<0.05)，表明健脾法、疏肝法有抗脂肪肝的作用。祛濕組、活血組、綜合組大鼠肝細(xì)胞脂肪變與模型組比較雖有改善的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3．電

4、鏡觀察：模型組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴，線粒體腫脹，嵴排列紊亂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹。健脾組、疏肝組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)接近正常，含少量脂滴，細(xì)胞核、線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)正常。其他各用藥組超微結(jié)構(gòu)改變情況介于模型組和疏肝組、健脾組之間。 4．對(duì)肝Kupffer細(xì)胞CD14 mRNA和肝組織NF-кB<'65><,P>表達(dá)的影響：疏肝、健脾治法及方藥可顯著抑制肝組織NF-кB<'65><,P>表達(dá)，健脾方藥能顯著降低Kupffer細(xì)胞CD14 mR

5、NA的表達(dá)。 5．肝Kupffer細(xì)胞中ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白活性的變化：模型組大鼠Kupffer細(xì)胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表達(dá)及磷酸化水平顯著增加，各用藥干預(yù)組大鼠Kupffer細(xì)胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表達(dá)及磷酸化水平顯著降低，其中以健脾組、疏肝組下降最為顯著。 1．飲食不節(jié)、勞逸失度是脂肪肝的主要病因，肝、脾功能失調(diào)是脂肪肝的基本病機(jī)。 2．健脾法、疏肝

6、法具有顯著抗脂肪肝作用，是防治脂肪肝的重要治法。 3．健脾、疏肝治法及方藥可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、減輕肝臟脂肪變性、保護(hù)肝細(xì)胞、減輕肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)、改善肝功能等發(fā)揮防治脂肪肝的作用。 4．健脾、疏肝治法及方藥抑SUTH~肪肝大鼠肝組織NF=KB<'65><,P>的表達(dá)，降低Kupffer細(xì)胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白活性及其磷酸化水平，可能是防治脂肪肝的主要作用機(jī)制之一。當(dāng)然，其防治脂肪肝可能是多途徑、多層次