MazF基因治療獼猴艾滋病模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、SHIV病毒感染艾滋病動(dòng)物模型是目前國外艾滋病模型研究的趨勢(shì)，被認(rèn)為是比現(xiàn)階段普遍應(yīng)用的SIV模型針對(duì)性更強(qiáng)、更有意義的動(dòng)物模型。國內(nèi)也已開始SHIV病毒感染艾滋病動(dòng)物模型的研究，本研究以SHIV—KB9(以SIVmac239病毒基因組和HIVB亞型env、tat、rev和vpu基因?yàn)橹黧w構(gòu)建的一株SHIV病毒)感染已導(dǎo)入MazF基因和未導(dǎo)入MazF基因的中國獼猴，進(jìn)行了包括臨床表現(xiàn)、病毒血癥、免疫學(xué)和基因拷貝數(shù)等方面研究。 本

2、研究共選用了9只中國獼猴，實(shí)驗(yàn)前經(jīng)血清學(xué)間接免疫熒光抗體檢查法(IFA)檢查排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴T淋巴細(xì)胞性Ⅰ型病毒(STLV—1)和猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒(SRV—1、2、5)的感染和B病毒感染。分三組進(jìn)行，空白對(duì)照組1只(只進(jìn)行SHIV—KB9病毒攻擊)，編號(hào)T—bc，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組2只(未導(dǎo)入基因)，編號(hào)KUCD4+T01(T01)和KUCD4+T02(T02)；實(shí)驗(yàn)組6只(導(dǎo)入基因)，編號(hào)T—Mar、T—Jun、KUCD4+T

3、03(T03)、KUCD4+T04(T04)、 KUCD4+T05(T05)和KUCD4+T06(T06)，T—Mar和T—Jun動(dòng)物進(jìn)行了基因?qū)胛从肧HIV—KB9病毒攻擊。采用體外循環(huán)采集獼猴外周血PBMC和直接抽取獼猴外周血75mL分離PBMC，再進(jìn)行CD4+T細(xì)胞分離培養(yǎng)并導(dǎo)入基因，培養(yǎng)結(jié)束后收獲細(xì)胞靜脈回輸猴體后再進(jìn)行SHIV—KB9病毒感染。分別在感染前和感染后第0、3、8、11、14、17、21、24、28、35、49、

4、56、63、70、84、98天用EDTA抗凝管采集猴靜脈血3mL，取100ul抗凝血進(jìn)行血常規(guī)分析，其余抗凝血離心分離血漿用于病毒載量檢測(cè)，以監(jiān)測(cè)SHIV—KB9在猴體內(nèi)的復(fù)制；分離PBMC用于CD4+/CD8+值測(cè)定，以監(jiān)測(cè)SHIV—KB9感染實(shí)驗(yàn)猴后體內(nèi)免疫損傷情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示導(dǎo)入基因和回輸細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)獼猴其血漿病毒載量峰值都與已報(bào)道的推遲2周左右出現(xiàn)，比空白對(duì)照組推遲11天出現(xiàn)，其血漿病毒載量峰值比空白對(duì)照組峰值低約100倍，流式