周期性機(jī)械拉伸對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞增殖及膠原蛋白代謝的影響.pdf

1、皮膚創(chuàng)面愈合是一個(gè)復(fù)雜而有序的動(dòng)態(tài)生物學(xué)過程，依賴于成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的相互影響、相互作用。正常生理狀態(tài)下，人真皮成纖維細(xì)胞處于皮膚張力作用下，成纖維細(xì)胞的增殖、分化、膠原蛋白代謝及基因表達(dá)等生物學(xué)過程都與其所處的力學(xué)環(huán)境有關(guān)。了解與調(diào)控張力作用下成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為是促進(jìn)傷口愈合、提高愈合質(zhì)量、預(yù)防瘢痕異常增生等皮膚疾病及慢性難愈性創(chuàng)面的基礎(chǔ)與關(guān)鍵。體外研究周期性機(jī)械應(yīng)力刺激對(duì)成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，有助于進(jìn)一步了解皮膚創(chuàng)

2、面愈合的生物學(xué)機(jī)制，為皮膚疾病的治療方法及評(píng)估提供重要參考。本實(shí)驗(yàn)通過FX-4000柔性基底應(yīng)變加載系統(tǒng)對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行力學(xué)環(huán)境培養(yǎng)，研究力學(xué)刺激對(duì)成纖維細(xì)胞增殖及膠原蛋白基質(zhì)代謝的影響，主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)論如下:
　　1.采用膠原酶消化法原代提取與培養(yǎng)人真皮成纖維細(xì)胞，以3×104/ml密度接種于裱襯Ⅰ型膠原蛋白的柔性細(xì)胞6孔培養(yǎng)板，采用FX-4000柔性基底應(yīng)變加載系統(tǒng)對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞施加頻率為0.1Hz、拉伸幅度分別為

3、10％和20％的周期性機(jī)械拉伸，并于拉伸后24h和48h提取細(xì)胞mRNA、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液上清，以無壓力培養(yǎng)為靜態(tài)對(duì)照。
　　2.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，分析S期占整個(gè)細(xì)胞周期的百分比，S期代表細(xì)胞增殖特性，S期所占百分比越高，表明細(xì)胞增殖越旺盛。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與靜態(tài)對(duì)照組比較，10％拉伸幅度作用24h后，S期占細(xì)胞周期的比例顯著增高，隨著時(shí)間的推移，48h，S期占細(xì)胞周期的比例降低。成纖維細(xì)胞能夠?qū)?.1Hz、拉伸幅度1

4、0％、拉伸24h的力學(xué)刺激作出反應(yīng)，改變細(xì)胞周期，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，拉伸48h后反而下降。
　　3.周期性機(jī)械拉伸后，提取細(xì)胞內(nèi)總RNA，收集細(xì)胞培養(yǎng)液上清，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法研究各組成纖維細(xì)胞內(nèi)Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白mRNA的表達(dá);ELISA方法檢測(cè)各組上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:10％拉伸幅度作用24h、48h及20％拉伸幅度作用24h均可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白mRNA的表達(dá);10％拉伸幅度作用24