脂肪組織工程種子細(xì)胞篩選的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)和皮下脂肪來源前脂肪細(xì)胞(preadipocyte,Pra);篩選適合于脂肪組織工程的MSCs誘導(dǎo)成脂條件;觀察和分析人MSCs成脂誘導(dǎo)分化過程;識別、鑒定由人MSCs誘導(dǎo)的前脂肪細(xì)胞(differentiated bone marrowmesenchymal stem cells,DBM);比較人Pra與DBM的增殖及成脂分化能

2、力,從中為脂肪組織工程篩選出比較理想的種子細(xì)胞.并進(jìn)一步分析篩選出的種子細(xì)胞在體外擴(kuò)增階段,不同代次細(xì)胞的老化程度,為脂肪組織工程選擇合適代次的種子細(xì)胞提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù).結(jié)論人MSCs及皮下Pra在常規(guī)培養(yǎng)條件下易于獲得.用CD34及CD44雙抗體可簡便鑒定MSCs.人MSCs在體外普通培養(yǎng)條件下,不能自然成脂分化.人皮下4 Pra體外自然成脂分化能力比較弱,細(xì)胞融合并未促進(jìn)自然成脂;但成脂誘導(dǎo)后可完全分化.人Pra增殖、傳代快于MSC

3、s.人Pra表達(dá)aP2.MSCs在非融合狀態(tài)下誘導(dǎo)更易于成脂分化.MSCs在無血清培養(yǎng)及大劑量誘導(dǎo)劑復(fù)合誘導(dǎo)時(shí)很難存活.人MSCs在合適的誘導(dǎo)條件下,幾乎全部成脂分化.人MSCs成脂誘導(dǎo)3~6天,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)較多顆粒,是脂滴出現(xiàn)之前的主要形態(tài)變化標(biāo)志.該階段的分化已進(jìn)入前脂肪細(xì)胞階段.MSCs不表達(dá)A2COL6基因,但成脂誘導(dǎo)后可以表達(dá).結(jié)合顯微鏡下可見的細(xì)胞內(nèi)顆粒、aP2抗原的表達(dá)及A2COL6 mRNA的表達(dá)可以鑒定人MSCs誘導(dǎo)為前

4、脂肪細(xì)胞的分化階段.MSCs在我們的誘導(dǎo)條件下3~6天,分化為前脂肪細(xì)胞,第6天為前脂肪細(xì)胞與脂肪細(xì)胞的分化臨界點(diǎn),也是MSCs分化為前脂肪細(xì)胞的最大分化時(shí)間點(diǎn).Pra增殖能力強(qiáng)于MSCs及DBM;DBM表現(xiàn)出一定程度的負(fù)增殖.Pra與DBM及MSCs成脂分化潛能接近.在體外,MSCs成脂定向分化是可以識別的,但成脂定向造成增殖能力的喪失.綜合增殖、成脂分化潛能,Pra仍然是目前比較適合的脂肪組織工程的種子細(xì)胞.衰老相關(guān)-β-半乳糖苷酶