四川甘孜州藏雞沙門氏菌的分離鑒定、耐藥基因及可移動遺傳元件的檢測.pdf

1、藏雞主要分布在青藏高原海拔2200～4100m的半農(nóng)半牧區(qū)，是我國高海拔地區(qū)養(yǎng)雞業(yè)的重要品種資源。藏雞沙門氏菌病時有發(fā)生，耐藥性日益突出，給藏雞養(yǎng)殖業(yè)帶來了極大的威脅。
　　試驗采集四川甘孜州4個藏雞養(yǎng)殖場送檢的28只疑似患沙門氏菌病藏雞的心、肝、脾、肺、腎、卵巢（或睪丸）和腸內(nèi)容物，總計196份樣本，經(jīng)細菌分離純化、生化試驗、PCR鑒定和血清型鑒定，共獲得42株藏雞沙門氏菌，其樣本檢出率為21.43％(42/196)。42株沙門

2、氏菌共鑒定出6種血清型，其中鼠傷寒沙門氏菌（14株）、雞傷寒沙門氏菌（10株）、雞白痢沙門氏菌（8株）和腸炎沙門氏菌（6株）為主要的血清型。
　　采用CLSI(2013)推薦的瓊脂紙片擴散法(K-B)對42株藏雞沙門氏菌進行21種抗菌藥物的敏感性試驗。結果表明，藏雞沙門氏菌對21種抗菌藥物均表現(xiàn)不同程度耐藥。其中，對阿莫西林(90.48％)、羧芐西林(90.48％)的耐藥率最高，其次為氨芐西林(88.10％)、利福平(88.10％

3、)、復方新諾明(76.19％)、四環(huán)素(69.05％)、多西環(huán)素(59.52％)、氟苯尼考(54.76％)、頭孢唑啉(47.62％)、卡那霉素(47.62％)和鏈霉素(42.86％)，對慶大霉素(7.14％)、丁胺卡那(2.38％)的耐藥率最低。41株分離菌對3類以上的抗菌藥物耐藥，多重耐藥率為97.62％(41/42)。
　　應用PCR技術對42株藏雞沙門氏菌進行耐藥基因檢測。結果發(fā)現(xiàn)，分離株共檢出26種耐藥基因，其中β-內(nèi)酰胺

4、類耐藥基因blaTEM、blaCTX-M、blaSHV、blaOXA、blaPSE和blaCMY-2，以blaTEM檢出率最高(90.48％);氨基糖苷類耐藥基因addA1、addA2、addB、AacC2、aac(3)-Ⅲ和Aph(3')-Ⅱa，以addA2檢出率最高(85.71％);四環(huán)素類耐藥基因tetA、tetB、tetC，以tetA檢出率最高(83.33％);氯霉素類耐藥基因catA1、floR、CmlA，以CmlA檢出率最高

5、(57.14％);磺胺類耐藥基因sul1、sul2，以sul2檢出率最高(83.33％);喹諾酮類耐藥基因qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ⅰb-cr、oqxA、oqxB，以aac(6')-Ⅰb-cr檢出率最高(59.52％)。
　　應用PCR技術對41株藏雞多重耐藥沙門氏菌進行可移動遺傳元件檢測。結果共檢出traA、trbC、merA、tnpA/Tn3、tnpU、tnp513、tn1721、IS26和intI19種可

6、移動遺傳元件，其中traA、trbC為國內(nèi)首次從沙門氏菌中檢出。每株菌檢出3～8種可移動遺傳元件。通過質(zhì)粒接合試驗驗證了多重耐藥沙門氏菌中的耐藥基因和可移動遺傳元件具有可移動性。隨機將14株檢測到耐藥基因和可移動遺傳元件的多重耐藥沙門氏菌進行質(zhì)粒接合試驗，結果共獲得8株接合子，其接合成功率為57.14％(8/14)。
　　結論:196份藏雞樣本中，沙門氏菌樣本檢出率為21.43％(42/196);42株藏雞沙門氏菌分離株共6種血清