2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩83頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、MicroRNA(miRNA)是一類大小約為22個核苷酸的內(nèi)源性短非編碼RNA,廣泛存在于動植物體內(nèi),通常結(jié)合機體內(nèi)靶mRNA3'非編碼區(qū)(3'UTR)從而抑制mRNA的翻譯進而對基因表達(dá)起負(fù)調(diào)控作用。根據(jù)miRNA在基因組上與其它轉(zhuǎn)錄單位的位置關(guān)系,miRNA可分為基因間miRNA(intergenic miRNAs)和基因內(nèi)miRNA(intragenic miRNA),而后者包括蛋白質(zhì)編碼基因的外顯子或內(nèi)含子miRNA。目前,盡管

2、在動物和植物中對miRNA功能研究已經(jīng)揭示的很清楚了,但對miRNA基因自身的轉(zhuǎn)錄了解仍十分有限,而對位于基因內(nèi)的miRNA及其與宿主基因的轉(zhuǎn)錄關(guān)系,更是知之甚少。本實驗室前期對miR-135a在脂肪生成的作用和功能進行了探索研究,但miR-135a在脂肪生成過程中的本身轉(zhuǎn)錄機制并不清楚。因此,本研究采用生物信息學(xué)預(yù)測、啟動子雙熒光素酶報告基因載體、點突變、EMSA、ChIP、ChIP-qPCR、q-PCR和western blot等實

3、驗技術(shù)對miR-135a-1/2的轉(zhuǎn)錄機制進行了研究,主要研究結(jié)果如下:
  1.miR-135a-1與miR-135a-2位于宿主基因內(nèi)
  根據(jù)NCBI網(wǎng)站比對發(fā)現(xiàn),mmu-miR-135a-1位于Chr9上Glyctk基因的第4或第5個外顯子區(qū),mmu-miR-135a-2位于Chr10上Rmst基因的第12個內(nèi)含子區(qū)。由此表明miR-135a-1和miR-135a-2都是基因內(nèi)miRNA。
  2.基因內(nèi)miR

4、-135a-1和miR-135a-2獨立轉(zhuǎn)錄
  采用了生物信息學(xué)預(yù)測miR-135a-1/2上游潛在的啟動子,進而利用分段缺失構(gòu)建啟動子雙熒光素酶報告基因載體,瞬時轉(zhuǎn)染到3T3-L1、C3H10T1/2和BHK三種細(xì)胞中,根據(jù)雙熒光素酶活性檢測確定核心啟動子片段。再用相應(yīng)的生物學(xué)網(wǎng)站預(yù)測此片段中潛在的轉(zhuǎn)錄因子,構(gòu)建點突變質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染到3T3-L1細(xì)胞中,鑒定是否為核心轉(zhuǎn)錄因子,進而用EMSA和ChIP試驗驗證轉(zhuǎn)錄因子與啟動子是否結(jié)

5、合。試驗結(jié)果表明,miR-135a-1上游(-1128~-557 bp)和miR-135a-2上游(-2264~-1733bp)分別為核心啟動子區(qū),并且轉(zhuǎn)錄因子STAT5a同時結(jié)合在此核心啟動子區(qū)域內(nèi)。同時,點突變、EMSA和ChIP試驗結(jié)果得出STAT5a在細(xì)胞體外體內(nèi)與核心啟動子結(jié)合。試驗證實,miR-135a-1/2并不隨著各自的宿主基因轉(zhuǎn)錄,而是具有自身的獨立轉(zhuǎn)錄本。
  3.成脂轉(zhuǎn)錄因子STAT5a上調(diào)miR-135a表

6、達(dá)
  構(gòu)建STAT5a的超表達(dá)質(zhì)粒,瞬時轉(zhuǎn)染到3T3-L1細(xì)胞中,檢測miR-135a及其靶基因APC的表達(dá)量。試驗結(jié)果表明,超表達(dá)STAT5a后,miR-135a的表達(dá)量上調(diào),APC在mRNA水平上升但在蛋白水平下降。而干涉STAT5a后,miR-135a的表達(dá)量下降,APC在mRNA水平和蛋白水平上升。試驗表明,STAT5a上調(diào)miR-135a的表達(dá)。
  4.轉(zhuǎn)錄因子STAT5a與miR-135a的靶基因APC存在一

7、個潛在的負(fù)反饋調(diào)節(jié)環(huán)路
  為了探索轉(zhuǎn)錄因子STAT5a與miR-135a的靶基因APC之間的關(guān)系,本研究在超表達(dá)STAT5a的基礎(chǔ)上,誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞成脂肪細(xì)胞的過程中,檢測STAT5a和APC的表達(dá)情況。試驗結(jié)果得出,STAT5a和APC在mRNA水平和蛋白水平都呈現(xiàn)出此消彼長的趨勢,而miR-135a的表達(dá)與之前對miR-135a的功能研究結(jié)果一樣都是隨著脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)加深表達(dá)量一直下降的。試驗結(jié)果顯示,在脂肪沉積過

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論