晶狀體上皮細(xì)胞光損傷與活性氧作用及TGF-β2-Smad3信號傳導(dǎo)通路的研究.pdf

1、分類號：R77密級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位√o學(xué)校代碼：10062學(xué)號：2011701030學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又坪鼉科鼻號TlA—JI—M纛DlCI瞧UNIVE萋lSlTY博士學(xué)位論文DoCToRALDISSERTATIoN論文題目：晶狀體上皮細(xì)胞光損傷與活性氧作用及TGF182／Smad3信號傳導(dǎo)通路的研究TITLEStudyonphoticinjuryandreactiveoxygenandTGFD2／Smad3signaling

2、pathwayinlensepithelialcells一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：眼科學(xué)論文作者：魏樹瑾指導(dǎo)教師：湯欣教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要目的：白內(nèi)障是全世界首位的致盲性眼病，雖然不同的損傷因子導(dǎo)致白內(nèi)障的通路和機制各不相同，但是它們大多通過一共同的中間產(chǎn)物——活性氧，累積的光暴露誘發(fā)的活性氧自由基所導(dǎo)致的晶狀體上皮細(xì)胞凋亡與老年性白內(nèi)障的發(fā)生關(guān)系密切，另外TGF132／Smad3信號

3、傳導(dǎo)通路與白內(nèi)障及晶狀體上皮細(xì)胞凋亡之問的關(guān)系得到越來越多的關(guān)注。本研究采用發(fā)光二極管(1ightemittingdiode，LED)光源制作晶狀體上皮細(xì)胞(1ensepithelialcell，LEC)光損傷模型，探討LEC光損傷與活性氧和TGF一[3JSmad3信號傳導(dǎo)通路之間的關(guān)系，本研究進(jìn)一步觀察了具有活性氧清除作用的丹參素和阻斷TGF132／Smad3信號傳導(dǎo)通路對LED光源誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞光損傷所致凋亡的影響，進(jìn)一步評價

4、了活性氧和TGFB2／Smad3信號傳導(dǎo)通路在以上過程中的作用。方法：本研究包括三部分：1使用LED光源20000勒克斯照度0h、6h、12h、24h照射LEC，使用流式細(xì)胞術(shù)檢測LEC內(nèi)活性氧的表達(dá)及細(xì)胞凋亡情況，分別使用Real—timePCR和Westernblotting檢測BAX和TGFB2mRNA和蛋白表達(dá)，使用四甲基噻唑藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞增殖。2在第一部分基礎(chǔ)上，使用具有活性氧清除功能的丹參素，觀察丹參素光照組和光照組

5、LEC在LED光源20000勒克斯照度照射24h后，細(xì)胞內(nèi)活性氧的表達(dá)、細(xì)胞凋亡率、BAX基因和BAx蛋白表達(dá)等各項指標(biāo)的差異。3以pSilencer21U6neo為質(zhì)粒載體，構(gòu)建Smad3的siRNA表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌、酶切、測序進(jìn)行鑒定，利用siRNA阻斷Smad3信號傳導(dǎo)通路后，觀察其與對照組在LED光源20000勒克斯照度照射24h后，細(xì)胞凋亡率、BAX基因和BAX蛋白表達(dá)等各項指標(biāo)的差異。結(jié)果：1光照0h組、6h組、12h

6、組、24h組LEC內(nèi)活性氧平均熒光強度、早期凋亡率、總凋亡率隨光照時間的延長逐漸上升，且各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸005)。光照6h、12h、24h組，BAX的mRNA表達(dá)較0h組分別升高約145倍、545倍和1586倍，TGF132的mRNA表達(dá)分別升高約122倍、179倍和401倍，各組問表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(JP005)。光照24h組BAX和TGF132蛋白的表達(dá)量分別較0h組升高約185倍和2倍。MTT實驗0h組和24h組在57