急性手機微波輻射對人晶狀體上皮細(xì)胞DNA的損傷作用及細(xì)胞抗損傷反應(yīng)的實驗研究.pdf

1、本實驗分為二部分:第一部分急性手機微波輻照對人眼晶狀體上皮細(xì)胞DNA的損傷和修復(fù)及其細(xì)胞增殖情況的影響 [目的]不同劑量急性手機微波輻射2小時，檢測其對體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞(humanlensepithelialcells，hLECs)的DNA損傷作用及停止輻照后不同時間段的DNA修復(fù)情況，并用BrdU-Kit檢測輻照后hLECs的增殖活性，以初步探討體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞對手機微波輻射損傷的耐受情況。 [方

2、法]體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞(humanlensepithelialcells，hLECs)，分為輻照組和假照組，置于sXc-1800細(xì)胞輻照(發(fā)射217Hz脈沖調(diào)制的1.8GHz微波)系統(tǒng)內(nèi)連續(xù)波輻照2小時，輻照強度(specificabsorptionrate，比吸收率SAR)分別為1，2，3，4w/kg，假照組為0w/kg，分別于輻照后0、0.5、1、2、4小時進(jìn)行彗星試驗，檢測細(xì)胞的DNA單鏈斷裂情況，以判定細(xì)胞DNA的損傷及其

3、修復(fù)情況。各組輻照后分別在培養(yǎng)液中加入BrdU，繼續(xù)培養(yǎng)1小時后BrdU-Kit顯色，計數(shù)細(xì)胞增殖率。 [結(jié)果]1.0和2.0w/kg輻照誘導(dǎo)的DNA損傷與假照組相比在各個檢測時段皆無顯著性差異(P＞0.05)，輻照后即刻進(jìn)行的檢測發(fā)現(xiàn)3.0w/kg和4.0w/kg組DNA損傷與假照組相比差異具顯著性(P＜0.01)，3.0w/kg組的差異在修復(fù)半小時后仍然存在(P＜0.05)，修復(fù)1小時后消失(P＞0.05)，而4.0w/kg

4、組差異在各檢測時段持續(xù)存在(P＜0.01)。BrdU-Kit檢測到≤3w/kg各組細(xì)胞增殖情況差別無顯著性(P＞0.05)，而4.0w/kg組細(xì)胞增殖率降低，差異具顯著性(P＜0.01)。 [結(jié)論] 1.彗星實驗是一種可靠的快速檢驗微波致人晶狀體上皮細(xì)胞DNA損傷的實驗方法，并可對輻照后細(xì)胞的DNA修復(fù)情況進(jìn)行檢測。 2.1.0和2.0w/kg的1.8GHz手機微波急性輻照對體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞的DNA無明

5、顯損傷作用，3w/kg的輻照劑量可造成可修復(fù)性損傷，表現(xiàn)為輻照結(jié)束后1小時DNA損傷完全修復(fù)，對其后的細(xì)胞增值情況亦無影響，說明細(xì)胞內(nèi)存在強大的抗損傷和修復(fù)機制。 第二部分急性手機微波輻照對人眼晶狀體上皮細(xì)胞HSP70、αB-crystallin基因表達(dá)水平的影響 [目的]不同劑量急性手機微波輻照體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞(humanlensepithelialcells，hLECs)2小時后，檢測細(xì)胞內(nèi)HSP70、αB

6、-crystallin在蛋白質(zhì)和mRNA水平的表達(dá)量，以初步探討細(xì)胞抗應(yīng)激損傷的反應(yīng)情況。 [方法]體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞(humanlensepithelialcells，hLECs)，分為輻照組和假照組，置于sXc-1800細(xì)胞輻照(發(fā)射217Hz脈沖調(diào)制的1.8GHz微波)系統(tǒng)內(nèi)連續(xù)波輻照2小時，輻照強度(specificabsorptionrate，比吸收率SAR)分別為1，2，3，4w/kg，假照組為0w/kg，輻照

7、后western-blot免疫印跡分別檢測hLECs內(nèi)HSP70和αB-crystallin基因在蛋白質(zhì)水平表達(dá)的變化，RT-PCR檢測HSP70和αBcrystallin在mRNA水平表達(dá)的變化。 [結(jié)果]各輻照劑量下hLECs內(nèi)都有可檢測到的HSP70和αB-crystallin基因在蛋白質(zhì)和mRNA水平的表達(dá)。各輻照組與假照組相比，2，3和4w/kg的手機微波輻照2小時可引起HSP70蛋白質(zhì)量表達(dá)的增強，但三組間表達(dá)量間無

8、差異顯著性(P＜0.05)。各輻照劑量下αB-crystallin蛋白質(zhì)表達(dá)均無明顯改變。RT-PCR檢測均未發(fā)現(xiàn)HSP70和αBcrystallin基因的mRNA表達(dá)水平有變化。 [結(jié)論]非應(yīng)激狀態(tài)下人晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)即有HSP70和αB-crystallin基因在表達(dá)。微波輻照可引起應(yīng)激蛋白HSP70表達(dá)增強，提示HSP70在微波損傷中發(fā)揮抗損傷作用，保護(hù)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，小分子HSP如αB-crystallin似乎