金銀花中高純度綠原酸提取純化工藝的研究.pdf

1、綠原酸具有顯著的清熱解毒、抗菌消炎等藥理作用，高純度綠原酸主要應(yīng)用于中成藥的生產(chǎn)。目前，我國(guó)高純度綠原酸都從國(guó)外進(jìn)口，價(jià)格十分昂貴。金銀花是一種多年生的藤本灌木，在我國(guó)分布很廣，從豐富的金銀花資源中提取純化高純度綠原酸，具有重要的意義。
　　 本論文以山東平邑金銀花為原料，建立薄層層析-紫外分光光度法快速準(zhǔn)確測(cè)定綠原酸含量，利用超臨界流體萃取技術(shù)去除金銀花揮發(fā)油成分，進(jìn)而確定了超聲波提取綠原酸的最佳工藝，并通過乙醇沉淀、鋅鹽沉淀

2、、乙酸乙酯萃取和DM-130型大孔樹脂等方法純化得到綠原酸。最后，對(duì)純化的綠原酸穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。
　　 結(jié)果如下:
　　 1.綠原酸含量測(cè)定方法的研究:
　　 通過分析比較，確定實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)綠原酸含量的方法為薄層層析—紫外分光光度法。與高效液相色譜法測(cè)定結(jié)果基本一致，平均回收率達(dá)96.0％，RSD為0.86％，精密度試驗(yàn)的變異系數(shù)0.03％(n=7)。
　　 2.金銀花的超臨界預(yù)處理:
　　

3、將金銀花原料用超臨界流體萃取技術(shù)去除金銀花揮發(fā)油，處理后金銀花待后序工藝提取純化綠原酸。金銀花揮發(fā)油經(jīng)分子蒸餾后精制成金銀花精油。
　　 超臨界萃取條件為:壓力30MPa，溫度45℃，二氧化碳流量25kg/h，時(shí)間2.5h;
　　 分子蒸餾條件:絕對(duì)壓力2-4Pa、轉(zhuǎn)速250-270r/min、流速2.1-2.4mL/min、分餾溫度120℃，得到金銀花精油，經(jīng)氣相色譜—質(zhì)譜分析含有36種成分。
　　 3.綠原酸

4、提取工藝研究:
　　 采用超聲波法提取綠原酸，將去除揮發(fā)油的金銀花以乙醇為提取劑，采用單因素和正交試驗(yàn)的方法，通過多重比較等統(tǒng)計(jì)手段，對(duì)影響綠原酸提取率的主要因素進(jìn)行分析，得到最佳工藝條件:提取溶劑為60％的乙醇，提取溫度70℃，提取時(shí)間3h，pH4，料液比1∶14(W/V)，在此工藝下，綠原酸得率為1.93％。
　　 4.綠原酸純化工藝研究:
　　 將綠原酸提取液通過乙醇沉淀、鋅鹽沉淀、乙酸乙酯萃取后經(jīng)液相色譜

5、—電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜分析，最后采取水反萃工藝等純化方法。
　　 ①乙醇沉淀:選取90％乙醇作為沉淀劑，料液比1∶5(V/V)，pH4，在3-4℃條件下冷析1h，能夠保證沉淀充分，綠原酸以分子形式存在。
　　 ②鋅鹽沉淀:pH5.5-5.7，200mg/mL綠原酸提取物15mL用1mol/L的ZnCl22.0mL沉淀完全;正交試驗(yàn)確定綠原酸—鋅鹽沉淀物轉(zhuǎn)溶的條件:pH1.5，料液比1∶3(V/V)，60℃水浴中轉(zhuǎn)溶1次。

6、>　　 ③乙酸乙酯萃取工藝條件:濃縮液初始濃度40mg/mL，濃縮液與乙酸乙酯用量比1∶2(V/V)，萃取兩次。將乙酸乙酯層經(jīng)液相色譜—電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-ESI/MS2）分析，主要雜質(zhì)成分為異綠原酸。
　　 ④水反萃工藝:將上步中乙酸乙酯層與水的混合比例確定為1∶3（V/V），能夠去除異綠原酸等雜質(zhì)成分，將綠原酸萃取到水層。
　　 5.大孔吸附樹脂精制綠原酸:
　　 在5種大孔吸附樹脂中篩選出一種最為適

7、宜的樹脂DM-130，吸附液綠原酸濃度0.236mg/mL、pH為4、流速4BV/h;解吸劑為50％乙醇、流速2BV/h，pH為2。
　　 6.精制綠原酸產(chǎn)品的物理評(píng)價(jià):
　　 精制綠原酸產(chǎn)品經(jīng)高效液相色譜測(cè)定含量為91.2％，樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，精密度RSD0.68％(n=5)，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為0.23％(n=5)，平均回收率100.88％，平均RSD為0.56％。
　　 對(duì)產(chǎn)品物理評(píng)價(jià)結(jié)果:100℃左右