非特異性結(jié)合對(duì)CYP3A4酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響.pdf

1、在藥物研發(fā)中，利用體外數(shù)據(jù)來預(yù)測人體內(nèi)藥物代謝性質(zhì)的早期ADME性質(zhì)研究方法極大地提高了藥物開發(fā)的能力，但是，體外研究中復(fù)雜的影響因素直接影響了體外數(shù)據(jù)的真實(shí)性，進(jìn)而對(duì)預(yù)測的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。因此，在藥物研發(fā)中，體外影響因素的研究對(duì)于開發(fā)出具有良好藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的藥物具有著重要意義。作為最重要的藥物代謝酶，CYP3A4參與了近50％臨床藥物的代謝，是這些藥物從體內(nèi)清除的主要限速酶。CYP3A4的影響因素決定了體外研究中眾多化合物的代謝性質(zhì)

2、能否準(zhǔn)確預(yù)測。本文旨在探討非特異性結(jié)合對(duì)于CYP3A4酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響，完善CYP3A4的體外代謝模型，從而確保得到準(zhǔn)確的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)及進(jìn)行體內(nèi)藥物清除的準(zhǔn)確預(yù)測。 本研究以CYP3A4的探針底物及其特異反應(yīng)——睪酮6β羥基化和硝苯地平氧化反應(yīng)來指示CYP3A4的活性，利用平衡透析和高效液相色譜法，對(duì)睪酮、硝苯地平在鼠肝微粒體和人肝微粒體體系中的非特異性結(jié)合進(jìn)行了定性、定量分析。睪酮和硝苯地平與鼠肝和人肝微粒體體系均存

3、在較弱的非特異性結(jié)合，在鼠肝和人肝微粒體體系中二者的游離比例分別為：睪酮0.84±0.07和0.75±0.05，硝苯地平0.87±0.04和0.83±0.03。通過兩種微粒體體系的相互驗(yàn)證，證明睪酮、硝苯地平與微粒體體系的非特異性結(jié)合均為等比例不可飽和的非特異性結(jié)合，即實(shí)驗(yàn)體系中藥物的游離濃度和結(jié)合濃度均隨著加入藥物總濃度的增加而增加，但是游離比例基本保持不變。進(jìn)一步就非特異性結(jié)合對(duì)CYP3A4催化的睪酮6β羥基化反應(yīng)和硝苯地平氧化反應(yīng)

4、動(dòng)力學(xué)的研究顯示，排除非特異性結(jié)合影響后，兩個(gè)肝微粒體體系中，睪酮和硝苯地平原有的S形動(dòng)力學(xué)曲線均左移、曲線形狀趨近于經(jīng)典米氏方程的矩形雙曲線形狀，而且Eadie-Hofstee作圖均有直線化趨勢。同時(shí)利用Hill方程進(jìn)行動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算，Vmax和Hill系數(shù)n基本無變化，但S50卻被高估，進(jìn)而導(dǎo)致對(duì)于藥物清除的預(yù)測Clmax的低估。 本研究表明，非特異性結(jié)合對(duì)于CYP3A4催化機(jī)理研究及代謝參數(shù)的正確評(píng)估具有重要作用。這提示