ERK1-2、PCNA在兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣動脈壁中動態(tài)表達(dá)的實驗研究.pdf

1、目的：探討兔枕大池二次注血法建立SAH后CVS的模型、ERK1/2和PCNA在兔SAH后腦血管壁的動態(tài)表達(dá)及血管壁細(xì)胞病理性增殖過程 方法：①選擇體重2.5—3.0kg，兔齡6—9個月健康大耳白兔，用10％水合氯醛腹腔麻醉(3—5ml/kg)，檢驗兔呼吸及心率，將兔固定于操作臺上，枕項部剃毛，常規(guī)消毒，于枕部中線作一直切口，長2.5cm，用5號頭皮針穿刺枕大池，按照0.5ml/kg放出腦脊液后，立即從兔耳中央動脈按照1ml/kg

2、抽取動脈血注入枕大池中，一般1min左右，防止注射過慢血液凝固，立即將兔頭低位30°，持續(xù)15min。第一次枕大池注血定義為實驗第一天(SAH1d)，依此類推，在首次注血48h后(SAH3d)，以同樣的方法行第二次枕大池注血，制作兔SAH模型。②觀察對照組、SAH各組及DSA組動物的飲食情況、活動情況及神經(jīng)功能變化等，并記錄SAH14天組每只兔每天的具體情況、對動物予以評分。③造影組8只兔每只兔分別于一次枕大池注血前(Day1)和一次注

3、血后第7天(Day7)行兩次腦血管數(shù)字減影檢查。④將基底動脈標(biāo)本浸泡于2.5％戊二醛中預(yù)固定24小時，1％四氧化餓再固定，丙酮逐級脫水，EponslZ包埋，半薄切片光學(xué)定位，超薄切片醋酸鈾及構(gòu)椽酸鉛雙重染色，超薄切片用JEM—1200EX型透射電鏡觀察，拍片。⑤應(yīng)用Western blot檢測PCNA、p—ERK1/2及T—ERK1/2蛋白的動態(tài)表達(dá)。 結(jié)果：⑴與對照組相比，SAH后7天基底動脈直徑顯著縮小(P<0.05)，有統(tǒng)

4、計學(xué)意義。⑵各只兔在SAH后3天臨床癥狀加重，7天時達(dá)到頂峰，而后逐漸好轉(zhuǎn)，14天時恢復(fù)正常。⑶SAH Day3組和Day7組實驗動物開顱取材，蛛網(wǎng)膜下腔可見血性CSF，腦底部、腦池內(nèi)，尤其是基底動脈周圍存在大小不等暗紅色血凝塊，周圍蛛網(wǎng)膜稍粘連，對照組和SAH Day14組則無異常表現(xiàn)。⑷光、電鏡觀察到基底動脈壁在SAH后3天、7天發(fā)生了顯著的病理性增殖改變，而SAH后14天無明顯病理改變。⑸T—ERK1/2無顯著性差異，而p—ERK