氫氣飽和生理鹽水對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的實驗研究.pdf

1、目的：蛛網(wǎng)膜下腔出血（Subarachnoid hemorrhage。SAH）是神經(jīng)外科臨床常見的致死、致殘率極高的腦血管疾病。腦血管痙攣（Cerebral vasospasm,CVS）是蛛網(wǎng)膜下腔出血最常見的高危并發(fā)癥之一，其發(fā)生率高達30℅~90℅。到目前為止，臨床上尚無療效肯定的治療方法，且有治療效果的藥物治療時間窗及對腦功能的保護機制亦不明確。近期研究發(fā)現(xiàn)氫氣可作為一種新型選擇性抗氧化劑在缺血缺氧性腦病、缺血再灌注損傷、炎癥性疾

2、病等疾病中有治療作用，其作用機制可能與抗炎、抗氧化等有關(guān)。另外研究發(fā)現(xiàn)氫氣飽和生理鹽水（Hydrogen saturated saline。HS）腹腔注射大鼠可以明顯緩解蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣，改善腦功能，但是HS治療血管痙攣的時間窗及其療效尚未得到進一步的研究。因此，本研究擬利用大鼠動物模型上，腹腔注射HS，觀察HS對蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的緩解作用及對腦功能的保護作用，進一步探討HS治療的時間窗及其療效。
　　方法：選

3、取SD大鼠55只，通過建立大鼠枕大池二次注血蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，并隨機分為三組：氫氣飽和生理鹽水（SAH+HS）治療組（n=25）、生理鹽水（SAH+NS）治療組（n=25）、正常(Normal)對照組（n=5）。蛛網(wǎng)膜下腔出血模型組又進一步平均分為1d組、2d組、3d組、5d組、7d組(每小組5只)，動物造模成功后每天分別腹腔注射5ml/kg劑量氫氣飽和生理鹽水及等量的生理鹽水，按術(shù)前分組于手術(shù)后1d、2d、3d、5d、7d處死大鼠，

4、灌注取腦。觀察術(shù)后大鼠神經(jīng)功能評分改變、基底動脈（近、中、遠端）HE染色組織病理學(xué)變化及尼氏染色海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)及數(shù)量的變化。神經(jīng)功能評分采用獨立樣本t檢驗。術(shù)后第1d氫氣鹽水治療組、生理鹽水治療組和正常對照組基底動脈血管直徑及厚度使用單因素ANOVA分析，進一步使用最小顯著性差異法（least-significant difference。LSD）檢驗進行組間兩兩比較。術(shù)后第2d、3d、5d、7d氫氣生理鹽水治療組和生理鹽水治療組基底

5、動脈血管直徑及厚度數(shù)據(jù)采用兩樣本t檢驗。采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計并分析數(shù)據(jù)，以p﹤0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　SAH+HS治療組與SAH+NS治療組跟正常對照組相比神經(jīng)功能評分明顯降低（中位數(shù)評分，p﹤0.05），提示SAH后大鼠存在腦功能損害；而SAH+HS治療組與SAH+NS治療組神經(jīng)功能評分相比明顯增高（p﹤0.05），提示 HS治療可以減輕腦功能的損害。術(shù)后第1d氫氣鹽水治療組、生理鹽水

6、治療組和正常對照組實驗數(shù)據(jù)使用單因素ANOVA分析組間比較，結(jié)果顯示存在顯著差異（F=3.53。p=0.04），進一步使用最小顯著性差異法（least-significant difference。LSD）檢驗進行兩兩比較，提示氫氣鹽水治療組和生理鹽水治療組的基底動脈直徑小于正常對照組（648.35±19.32VS997.41±36.58,p=0.03和621.03±40.23VS997.41±36.58,p=0.04）；基底動脈厚度大

7、于正常對照組（25.38±0.85VS7.85±0.17。p=0.047和29.16±1.90VS7.85±0.17,p=0.007）。提示建模成功。氫氣生理鹽水治療組和生理鹽水治療組在術(shù)后第3d各項數(shù)據(jù)采用兩樣本 t檢驗，血管直徑比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（856.82±55.68 VS320.12±10.84，t=2.32,p=0.043），血管壁厚度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（22.99±0.99 VS53.61±2.49，t=2.81,p=

8、0.02）。而建模后第2d、5d、7d采用t檢驗各項數(shù)據(jù)均無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）。Nissl染色結(jié)果顯示，正常對照組神經(jīng)元胞體較大、胞質(zhì)藍染、核圓呈空泡狀，膠質(zhì)細胞呈細小藍色顆粒狀。蛛網(wǎng)膜下腔出血模型組神經(jīng)元萎縮深染、細胞間隙增寬、部分神經(jīng)元消失，壞死區(qū)膠質(zhì)細胞增生明顯。術(shù)后第2d和5d氫氣飽和生理鹽水治療組正常神經(jīng)元數(shù)目明顯多于生理鹽水治療組，神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)尼氏體增多，且生理鹽水治療組神經(jīng)元細胞水腫明顯。
　　結(jié)論：