MPS病和GSDⅡ病患者的基因診斷和基因治療探索.pdf

1、粘多糖病(Mucopolysaccharidoses，MPS)是一組由于粘多糖降解酶缺乏，使之不能完全降解而引起的溶酶體貯積癥，根據(jù)缺失的酶不同共分為7種類型(MPS I～VII)；糖原累積癥II型(Pompe’disease，glycogen storage type II，GSD II)是由于酸性-α-葡萄糖苷酶缺乏，使糖原無法正常分解而引起的溶酶體貯積癥。上述兩類遺傳病均是由于相關(guān)基因的突變引起的，目前的治療方法主要是骨髓移植和酶

2、替代療法。但骨髓移植難以找到合適的供體；酶替代療法的重組酶價(jià)格昂貴、治療費(fèi)用高，并且因無法透過血腦屏障，對(duì)智力缺陷的患者不能起到治療作用。基于上述原因，有必要探索針對(duì)上述兩類遺傳病的新的治療途徑。 同源重組技術(shù)，也稱基因打靶，是迄今為止改造致病基因的最安全有效途徑。采用基因打靶技術(shù)，在患者體細(xì)胞水平上對(duì)致病基因進(jìn)行修復(fù)，然后應(yīng)用體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得重組胚，分離出胚胎干細(xì)胞(ES cells)，經(jīng)過體外定向誘導(dǎo)分化，使之成為所需要

3、的細(xì)胞、組織或器官，移植回病人體內(nèi)將不會(huì)受到免疫排斥，此方法也稱治療性克隆。目前已成為許多國(guó)家的重點(diǎn)研究課題。近年來，利用腺相關(guān)病毒(AAv)載體進(jìn)行基因治療，由于方法簡(jiǎn)單易行，該領(lǐng)域研究也相當(dāng)活躍。 在本課題中，首先，用分子遺傳學(xué)方法對(duì)MPS I、II、VI和GSD II病患者進(jìn)行基因突變分析，共發(fā)現(xiàn)7個(gè)國(guó)際上從未報(bào)道過的人類新突變(http://WWW：hgmd.org)，并首次完成了對(duì)我國(guó)大陸MPS VI和GS

4、D II患者的遺傳突變分析和基因突變功能鑒定，從而明確了患者發(fā)病的分子遺傳學(xué)機(jī)制，為開發(fā)治療性克隆途徑奠定了基礎(chǔ)。其次，利用近年來誕生的recombineering技術(shù)，成功地構(gòu)建了人類GSD II和MPSI致病基因打靶載體，該打靶載體設(shè)計(jì)完成時(shí)國(guó)內(nèi)外均未見同類報(bào)道，為患者細(xì)胞水平上的基因打靶修復(fù)和探索治療性克隆途徑奠定了基礎(chǔ)。最后，為了探索AAV基因治療途徑的可行性，對(duì)GSD II病進(jìn)行了AAV細(xì)胞水平上的基因治療研究，發(fā)現(xiàn)可以修復(fù)人