文蛤“菊花瘟”在江蘇地區(qū)的流行病學(xué)、病理學(xué)以及病原學(xué)研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文文蛤“菊花瘟”在江蘇地區(qū)的流行病學(xué)、病理學(xué)以及病原學(xué)研究姓名：萬夕和申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：陸承平20081201文蛤“菊花瘟”在江蘇地區(qū)的流行病學(xué)、病理學(xué)及病原學(xué)研究化，主要表現(xiàn)為：外套膜、鰓、消化管、足等上皮細胞腫漲、變性、破裂或脫落，結(jié)締組織增生、變性或溶解，血淋巴細胞增多，肌纖維結(jié)構(gòu)松散、斷裂，組織中嗜堿性細胞增多；鰓組織發(fā)生壞死崩解；消化盲囊腺泡廣泛受損，導(dǎo)管上皮及結(jié)締組織發(fā)生溶解對

2、照組文蛤無上述病變采用透射電鏡觀察了發(fā)病文蛤的超微結(jié)構(gòu)和細胞病理學(xué)變化。結(jié)果顯示：在病蛤的鰓、肝臟、消化管、外套膜等組織中有大量病毒樣粒子的存在，該粒子呈球形或橢球形，無囊膜，直徑在45～55nm，核心與核衣殼間無明顯界限，大量存在于細胞間質(zhì)及被破壞的細胞質(zhì)中，少數(shù)存在于細胞核中，同時可見病毒包涵體的存在被該病毒樣粒子感染的細胞具有明顯的病理變化，主要表現(xiàn)為：線粒體峭消失，固縮或溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫漲并空泡化，溶酶體數(shù)量增多，嚴重的多數(shù)細胞器

3、消失，細胞溶解上述結(jié)果提示，文蛤“菊花瘟”的發(fā)生可能與該病毒樣粒子有關(guān)采用差速離心、酒石酸鉀墊超速離心與氯化銫密度梯度離心等方法純化文蛤“菊花瘟”病毒，比較了蔗糖、酒石酸鉀甘油與氯化銫三種不同介質(zhì)密度梯度離心的方法研究表明，氯化銫密度梯度離心適合于該病毒粒子的分離提純。經(jīng)稱量法得到文蛤“菊花瘟”病毒粒子在氯化銫中的浮力密度為1554～15829／mL透射電鏡負染觀察純化的病毒粒子顯示病毒粒子呈球形，二十四面體對稱，無囊膜，直徑6075n

4、m，表面粗糙，有明顯的殼粒結(jié)構(gòu)。利用已報道的水生雙RNA病毒的引物PrBl：5’GccGAcATcGTCAAcTCcAc一3’，PrB2：5GACAGGATCATCTTGGCATA3’，采用RTPCR方法，以病毒RNA的cDNA為模板進行擴增，對文蛤“菊花瘟”病毒進行了鑒定結(jié)果擴增出大小為524bp的目的條帶，與文獻所報道的水生雙IⅢA病毒相符通過差速離心與超微過濾相結(jié)合的方法，得到純化的文蛤組織病毒液，人工感染健康文蛤試驗分六組進行，