滅活肺炎鏈球菌對(duì)人單核細(xì)胞MMP-12表達(dá)的上調(diào)作用.pdf

1、肺炎鏈球菌寄生于人的鼻咽部，是人類主要的致病菌之一，可導(dǎo)致肺炎、菌血癥、中耳炎及腦膜炎等多種疾病，至今在兒童中仍有很高的死亡率，每年5歲以下兒童死亡病例中有10﹪是由肺炎鏈球菌感染所致。近年來，肺炎鏈球菌耐藥菌株的不斷增加，使得對(duì)肺炎鏈球菌感染的治療越來越困難，人體自身免疫系統(tǒng)在抵抗感染中的作用又逐漸地受到重視。 感染肺炎鏈球菌后，機(jī)體多種免疫機(jī)制參與清除致病菌的反應(yīng)，其中肺巨噬細(xì)胞作用獨(dú)特，它不僅直接吞噬細(xì)菌、分泌細(xì)胞因子、產(chǎn)

2、生抗體，還可以清除其他壞死的炎癥細(xì)胞，比如壞死的中性粒細(xì)胞等。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)巨噬細(xì)胞缺失時(shí)，感染肺炎鏈球菌后，炎癥反應(yīng)更加劇烈，死亡率也更高。 肺巨噬細(xì)胞由外周血中的單核細(xì)胞進(jìn)入肺組織后分化而來。肺炎鏈球菌感染可以縮短骨髓中未成熟單核細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的時(shí)間，肺炎鏈球菌感染后，外周血中單核細(xì)胞的數(shù)目增加；此外，研究表明，肺炎鏈球菌感染后，肺組織中的巨噬細(xì)胞數(shù)目也增加，可見肺炎鏈球菌感染可以引起外周血單核細(xì)胞向肺組織中的募集。

3、 在從循環(huán)系統(tǒng)遷移到肺組織的過程中，外周血單核細(xì)胞需要穿過血管基底膜、肺組織，而血管基底膜及肺組織中含有大量的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)，比如膠原、彈性蛋白等，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases，MMPs)在單核細(xì)胞的遷移過程中發(fā)揮了重要的作用。 基質(zhì)金屬蛋白酶是一類鋅離子依賴的肽鏈內(nèi)切酶，降解多種細(xì)胞外基質(zhì)。迄今為止，至少發(fā)現(xiàn)了28種基質(zhì)金屬蛋白酶，它們?cè)诮M織

4、重構(gòu)、腫瘤轉(zhuǎn)移及細(xì)胞遷移中起主要作用。 單核細(xì)胞能分泌MMP-1,-2,-3,-7,-9,-14，-17,-25等多種基質(zhì)金屬蛋白酶，與B細(xì)胞、T細(xì)胞等其他炎癥細(xì)胞相比，單核細(xì)胞合成的MMP種類更多，因此單核細(xì)胞比其他炎癥細(xì)胞有更強(qiáng)的遷移能力。當(dāng)用基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的活性后，炎癥細(xì)胞遷移的能力也受到極大的抑制，它們雖然可以穿過血管的內(nèi)皮層，卻會(huì)被阻止在血管的基底膜層，無法正常遷移到炎癥部位。 MMP-

5、12又稱彈性蛋白酶，其主要作用底物是彈性蛋白，而彈性蛋白又富集于肺臟，因此，MMP-12在肺部疾病中扮演重要角色，參與肺部組織重構(gòu)、細(xì)胞遷移等多種病理生理過程。 本實(shí)驗(yàn)通過用滅活肺炎鏈球菌與外周血單核細(xì)胞共培養(yǎng)的方法，利用免疫組化(Immunohistochemistry)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白免疫印跡技術(shù)(Westernblot)等觀察肺炎鏈球菌對(duì)單核細(xì)胞MMP-12表達(dá)的影響。 實(shí)驗(yàn)分為濃度組和時(shí)

6、間組，分別從不同細(xì)菌濃度和不同作用時(shí)間兩方面觀察肺炎鏈球菌對(duì)單核細(xì)胞MMP-12表達(dá)的影響作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肺炎鏈球菌能明顯提高單核細(xì)胞MMP-12的表達(dá)，濃度組中以109CFU/ml(CFU：colonyformingunits)組作用最為明顯，MMP-12的表達(dá)比對(duì)照組高近三倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)；時(shí)間組中以12小時(shí)組作用最為明顯，MMP-12的表達(dá)比對(duì)照組高近五倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。 本