攜帶11R-p53和mGM-CSF基因載體的構建及其表達和對腫瘤細胞作用的研究.pdf

1、本文旨在構建攜帶有抗癌基因11R-P53和mGM-CSF基因的腺病毒載體，并檢測目的基因在體內(nèi)、體外腫瘤細胞中的表達情況來驗證其潛在的抗腫瘤效應；通過比較其與腺病毒SG7605-11R-P53和SG7605-mGM-CSF治療小鼠肝癌模型后瘤體增長情況的對比，來對我們的基因病毒治療系統(tǒng)SG655-mGMP的靶向性、有效性和安全性作以評價。
　　目的：構建攜帶11R-P53和mGM-CSF基因的病毒質(zhì)粒并檢測其在腫瘤細胞中的表達及其

2、對腫瘤的抑制作用。方法：利用酶切法重組目的基因并整合到腺病毒E1B-55KD區(qū)，測序正確后包裝并大量制備病毒質(zhì)粒，并命名為SG655-mGMP。采用50%組織培養(yǎng)感染劑量（TCID50）法測定病毒滴度。用MOI=5的腺病毒SG655-mGMP體外轉(zhuǎn)染 BJ細胞、Hep3B細胞、Huh7細胞及Hepa1-6細胞并用western blot法測定細胞培養(yǎng)液中目的基因的表達情況；在體內(nèi)，用處于對數(shù)生長期的Hepa1-6細胞按每只5×106的細

3、胞量接種于40只C57BL/6小鼠皮下，成瘤10mm左右時將小鼠隨機分為A、B、C、D四組，分別瘤內(nèi)多點注射SG655-mGMP、SG7605-11R-P53、SG7605-mGM-CSF和生理鹽水。用免疫組織化學染色的方法檢測各組小鼠腫瘤組織中P53基因和mGM-CSF基因表達情況并測量小鼠腫瘤生長狀況，并測量各組小鼠腫瘤在治療后腫瘤生長狀況。結果：成功構建 SG655-mGMP，測其滴度為7.3×109PFU/ml；目的基因可在體外